一氧化氮（Nitric oxide，NO）含量测定试剂盒说明书
微量法 100 管/96 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
NO（Nitric Oxide，NO）广泛分布于生物体内神经、循环、呼吸、消化、泌尿生殖等系统中，特别是神经组织中较丰富。它作为细胞间及细胞内的信息物质，发挥信号传递的作用，是一种新型的生物信使分子，在机体的生理、病理过程中起着重要的作用。
测定原理：
在体内或水溶液中极易氧化生成NO —，在酸性条件下，NO2—与重氮盐磺酸胺生成重氮化合物，进一步与萘基乙烯基二胺偶合，产物在 550nm 处有特征吸收峰，测定其吸光值，可以计算 NO 含量。
组成：
产品名称 | DC6004-100T/96S | Storage |
提取液：液体 | 100ml | 4℃ |
试剂一：液体 | 6ml | 4℃避光 |
试剂二：液体 | 6ml | 4℃避光 |
说明书 | 一份 |
试剂二：液体 6ml×1 瓶，4℃避光保存。(用之前 60℃加热震荡 15min)
自备仪器和用品：
天平、研钵或匀浆器、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、蒸馏水。
样品处理：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml 提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 15min，取上清，置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000g， 4℃，离心 15min，取上清置于冰上待测。
3. 体液和培养液等其它液态样品：直接测定。
测定步骤和操作表：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 550nm。
2、操作表
| 空白管 | 测定管 |
样品（μl） |
| 100 |
提取液（μl） | 100 |
|
试剂一（μl） | 50 | 50 |
试剂二（μl） | 50 | 50 |
混匀，室温静置 15min，于微量石英比色皿/96 孔板，测定A550，ΔA=A 测定-A 空白 |
NO 含量计算：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为：y= 0.016x -0.0103，R2= 0. 9986 1、组织样品：
（1） 按样本质量计算
NO 含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷W
（2） 按样本蛋白浓度计算
NO 含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样×Cpr）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷Cpr
2、细胞：
NO 含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）×10-3
= 0.125×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）
3、其他样品：
NO 含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.016×V 反总÷V 样
= 125×（ΔA +0.0103）
V 反总：反应总体积，0.2ml；V 样：反应中样品体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/ml
b. 用 96 孔板测定的计算公式如下
标准曲线回归方程为：y= 0.008x - 0.0103，R2= 0. 9986 1、组织样品：
（1） 按样本重量计算
NO 含量（μmol/g 鲜重）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反总÷（V 样÷V 样总×W）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷W
（2） 按样本蛋白浓度计算
NO 含量（μmol/mg prot）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反总÷（V 样×Cpr）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷ Cpr
2、细胞：
NO 含量（μmol/104 cell）=（ΔA +0.0103）÷0.008×V 反总÷（V 样÷V 样总×细胞数量）×10-3
= 0.25×（ΔA +0.0103）÷细胞数量（万个）
3、其他样品：
NO 含量（μmol/L）=（ΔA +0.0103）÷0.008× V 反总÷V 样= 250×（ΔA +0.0103）
V 反总：反应总体积，0.2ml；V 样：反应中样品体积，0.1ml；V 样总：加入提取液体积，1ml；W：样品质量，g；Cpr：蛋白浓度，mg/ml
