BCA 法蛋白含量测定试剂盒说明书
微量法 100T/96S
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
样品可溶性蛋白质含量常常用于酶活性计算。此外，可溶性蛋白质含量也用于食品等质量分析。
测定原理：
碱性条件下，蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键，能将 Cu2+还原成Cu+；2 分子的BCA 与Cu+结合，生成紫色络合物，在 540-595nm 有吸收峰，562nm 处吸收峰zui强。
组成：
产品名称 | DE6004-100T/96S | Storage |
试剂A: 液体 | 25ml | 4℃ |
试剂B：液体 | 0.5ml | 4℃ |
标准品：液体 | 2ml | 4℃ |
工作液配制：临用前请根据拟用工作液体积（样本数×0.2ml），将试剂A 和B 按照 50：1 的比例混合，盖紧后充分混匀。
自备仪器和用品：
台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、移液器和蒸馏水。
样品中可溶性蛋白质提取：
1、液体样品：澄清液体样品可以直接测定。
2、组织样品：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1ml提取液（自备，根据需要选用酶提取缓冲液或者蒸馏水或者生理盐水）冰浴匀浆，10000rpm，4℃离心 10min，取上清，即待测液。
3 、细菌、细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1ml 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000rpm， 4℃，离心 10min，取上清置于冰上待测。
测定操作：
1. 可见分光光度计/酶标仪预热 30min，调节波长到 562 nm，蒸馏水调零。
2. 工作液置于 60℃水浴预热 30 min。
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| 空白管 | 标准管 | 测定管 |
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蒸馏水（μl） | 4 |
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标准品（μl） |
| 4 |
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待测液（μl） |
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| 4 |
工作液（μl） | 200 | 200 | 200 |
混匀后置于 60℃保温 30min，于微量玻璃比色皿/96 孔板，于 562nm 处测定吸光值A，分 别记为A 空白管、A 标准管、A 测定管。 |
注意事项：空白管和标准管只需要做一次。
计算公式：
Cpr (mg/ml)= C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）
=0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）
Cpr (mg/g 鲜重)= C 标准品×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷ W
=0.5×（A 测定管－A 空白管）÷（A 标准管－A 空白管）÷ W W: 样本质量，g
注意事项：
BCA 法蛋白含量测定试剂盒，适用于测定蛋白浓度在 20-5000μg/ml 样品。测定前取 1-2 个样做预实验，若A 测定管－A 空白管﹥1.5，需将样本用提取液稀释后再测定，以确保测定的准确性。
