半胱氨酸（cysteine, Cys）含量测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/48 样
正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：
蛋白质含有三种含硫氨基酸：甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中，Cys 是唯yi一种含有巯基的含硫氨基酸，从甲硫氨酸转化而来，并且可与胱氨酸互相转化。Cys 参与蛋白质二硫键的形成，经常是蛋白质活性中心的组成部分，还可以为其它生理生化反应提供巯基。此外，Cys 大量积聚在皮肤和粘膜表面，在角蛋白生成中维持重要的巯基酶的活性，并且补充巯基，以维持皮肤的正常代谢，调节表皮最下层的色素细胞生成的底层黑色素。具有美白、解毒、改善炎症和过敏性皮肤等作用。
测定原理：
Cys 还原磷钨酸生成钨蓝，在 600nm 处有吸收峰；通过 600nm 吸光度，计算Cys 含量。
组成：
产品名称 | BH6013-50T/48S | Storage |
试剂一：液体 | 1 瓶 | 4℃ |
试剂二：液体 | 1 瓶 | 4℃ |
试剂三：粉剂 | 1 瓶 | 4℃ |
标准品：粉剂 | 1 瓶 | 4℃ 避光 |
说明书 | 1 份 |
试剂三用前 1 天，向试剂三中加 5 ml 蒸馏水充分溶解，再加 85％磷酸 1.25ml，混匀后盖紧（防止水分散失）沸水浴 2h；冷却后加 20 ml 蒸馏水，4℃可保存 2 周。
标准品临用前加 10 ml 蒸馏水，充分溶解。1μmol/ml 标准液，4℃避光保存。用不完的试剂 4℃可保存 3 天。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、低温离心机、可调式移液枪、1ml 玻璃比色皿、85％磷酸和蒸馏水。
半胱氨酸提取：
1. 液体样品中半胱氨酸提取：取 0.1ml 液体样品，加试剂一 0.9ml，充分混匀，8000g
4℃离心 10min，取上清液，待测。
2. 组织中半胱氨酸提取：按照组织质量（g）：试剂一体积(ml)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入 1ml 试剂一）进行冰浴匀浆，8000g 4℃离心 10 min，取上清液待测。
3. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：试剂一体积（ml）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1ml 试剂一），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定操作：
1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 600 nm，蒸馏水调零。
2. 空白管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 100 μl 蒸馏水，500μl 试剂二，500μl 试剂三，混匀后室温静置
15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为A 空白管。
3. 标准管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 100 μl 标准液，500μl 试剂二，500μl 试剂三，混匀后室温静置
15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为A 标准管。
4. 测定管：取 1ml 玻璃比色皿，加入 100 μl 上清液，500μl 试剂二，500μl 试剂三，混匀后室温静置
15 min，于 600nm 处测定吸光值，记为A 测定管。
注意：空白管和标准管只需要做一次。
计算公式：
1. 按液体样品的体积计算：
半胱氨酸含量（μmol/ml）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×（V样总÷V 样）=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)
2. 按样本质量计算：
半胱氨酸含量（μmol/g 鲜重）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×
（V 样总÷V 样）÷W=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷W
3. 按照蛋白浓度计算：
半胱氨酸含量（μmol /mg prot）= [C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]÷
（V 样×Cpr）=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷Cpr
4. 按细胞数量计算：
氨基酸含量（μmol /104 cell）=[C 标准品×V 标准品×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)] ×
（V 样总÷V 样×细胞数量）=1×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管) ÷细胞数量
C 标准品：标准品浓度，1μmol/ml；V 标准品：反应体系中加入标准品体积，0.1 ml；V 样：反应体系中加入样品提取液体积，0.1 ml；V 样总：加入提取液体积，1ml。W：样品质量，g；Cpr：样本蛋白浓度， mg/ml。
注意事项：
最di检出限为 100μmol/L。
