质粒及细胞系构建定制服务

质粒（Plasimid），它是一种独立于宿主染色体（拟核）之外的闭合环状双链DNA分子。它具有自主复制的能力，能够在子代细胞中保持恒定的拷贝数，还能够表达它所携带的遗传信息。此外，质粒载体通常携带抗性基因或报告基因，便于筛选和示踪。这一系列特征使得质粒在基因工程中具有较高的应用价值。质粒载体在基因表达调控中的作用如携带调控元件调控基因表达；实现诱导表达；实现基因沉默等等。

图1：(a)染色体DNA和质粒DNA示意图；(b)真核细胞表达质粒载体示例。

西安晖瑞可提供的质粒构建服务包括：

过表达质粒构建；

图2：真核表达人源MAP3K8基因质粒图谱

（2）诱导基因的定点突变；（单碱基突变，多碱基突变）

（3）构建基因截短体质粒；

图3：Stat3-full length和Stat3-delete Coiled-coiled domain截短体(红框为缺失序列）示意图

（4）亚克隆质粒构建；

图4：将人源化FOXO1从pFlag-CMV4载体(a)中亚克隆至DOX诱导表达的PLVX-Tetone载体(b)

（5）通过慢病毒介导的基因过表达；

(b)

(c) 

图5：(a)慢病毒包装的三质粒系统; (b)Map3k8慢病毒侵染293T细胞24 h荧光图片; (c)Western blot验证蛋白表达成功。

（6）通过构建shRNA慢病毒质粒实现基因的敲减；

(b)

(c)

图6：(a)DSC3-shRNA构建到pGLV3-H1/GFP shRNA慢病毒载体中；(b)DSC3-shRNA慢病毒侵染C2C12细胞24 h明场和荧光图片；(c)RT-qPCR验证mRNA水平敲降；(d)Western blot验证蛋白水平敲降。

（7）通过CRISPR-Cas9技术实现基因敲除。

图7：(a)将STAT3-sgRNA构建到lenti-CRISPR-V2慢病毒载体中；(b)Western blot验证蛋白敲除成功。

以上过表达和敲除均可提供**稳定细胞系