细胞名称：人脑髓母细胞瘤细胞LN-229ATCC

细胞代次：P4

细胞规格：T25瓶（包邮）/2冷冻管（需加干冰运输费）

细胞冻存：无血清冻存液

细胞传代：第一次建议1:2

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：

取出25cm2培养瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO2细胞培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态，然后换用新鲜*培养液继续培养或进行传代。

2、细胞传代：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀细胞用12ml*培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，zui后放入37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）待细胞*贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。

3、细胞冻存：

1）细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃25cm2培养瓶中的培养液，用PBS清洗细胞一次；

2）添加0.25%Y蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入*培养液终止消化，轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5min；

3）用适量的冻存液（FBS：DMSO=9 ：1）重悬细胞，并放置于冻存管中；

4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1.5h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期保存。使用程序降温盒可直接放入-80℃。

4、细胞复苏：

1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2）将冻存管中的细胞移至含5ml*培养基的15ml离心管中， 1000rpm离心5min；

3）弃上清，沉淀用5ml*培养基重悬，接种25cm2培养瓶，于37℃，5%CO2细胞培养箱中培养；

4）第二天，换用新鲜*培养基继续培养。

原代细胞与细胞系有什么区别？细胞培养物来源于原代外植体或分散的细胞悬液。通常在这样的培养物中细胞增殖形成汇合地单层细胞或密集地细胞悬液。根据传统定义，*次收获和接种的细胞被称为原代细胞[Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 这类细胞生命周期有限，在有限的生命周期内需掌握好细胞zui大的生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的*性。细胞系是不断生长，分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。实际上，连续细胞系可以用大量次培养基培养，随着代数的增加细胞的基因型和表型都有可能发生改变。需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群除非细胞经过了遗传改造。

1、倍增和代数有什么区别？倍增是培养物中细胞总数加倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。

2、接收到的冻存细胞该如何处理？收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快以避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。

3、有多少经验才能开始正常人类细胞培养？推荐有经验者在无菌环境下用层流净化罩工作，如果有经验的话对其它细胞类型也是很有利的。如果你是细胞培养的初学者或打算建立细胞培养实验室，我们会为你提供帮助。请的细胞培养专家。

售后服务告知书

1）细胞出现问题，可重发的情况有哪些？判定标准是什么？

1. 细胞运输途中遭遇的各种问题，细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等，重发；

2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内，给我们提出真实的实验结果，核实后重发；

3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后，绝大多数细胞未存活，（需提供真实清晰的细胞状态照片），重发；

4. 干冰冻存发货的细胞复苏后24小时后或常温发货的细胞静置4小时候并且未开封，出现污染，重发；

5. 细胞活性问题，请在收到产品7天内给我们提出真实的实验结果，用台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后予重发；

6. 细胞收到当天以及第2,3天请拍照，3天未告知的，视为产品合格。4-7天内出现问题有提供收到细胞前3天照片和细胞出现问题时照片以及细胞相关操作的详细步骤的，并跟技术人员沟通的，由技术人员判定为我方责任的，重发。技术人员判定为双方承担责任的由双方进行协商处理或者按合同价的50%收费重发。

二）细胞出现问题，不予以重发的情况有哪些？

1. 客户造成细胞污染，不重发；

2. 客户不正确操作致细胞状态不好，不重发；

3. 非本库推荐细胞培养体系致的细胞状态不好，不重发；

4. 细胞状态不好，未提供细胞培养前3天照片的，不重发；

5. 细胞培养时经其它处理的，不重发；

6. 细胞收到2天内，未告知，不重发；

7. 视具体情况而定。

YS4316C人多发性骨髓瘤细胞 MM.1S

YS4317C小鼠黑色素瘤细胞B16-F10

YS4318C人支气管上皮细胞BEAS-2B

YS4319C人结肠癌细胞CW-2

YS4320C人骨肉瘤细胞HOS

YS4321C人子宫颈表皮癌细胞ME-180

YS4322C人子宫内膜癌细胞KLE

YS4323C 人肾细胞腺癌细胞 ACHN

YS4324C人肾癌细胞769-P

YS4325C人脑髓母细胞瘤细胞Daoy

YS4326C人脑髓母细胞瘤细胞LN-229

YS4327C人膀胱癌细胞5637

YS4328C人乳腺癌细胞MDA-MB-361

YS4329C人乳腺导管癌细胞ZR-75-1

YS4330C人多发性骨髓瘤细胞U266B1

YS4331C人胎盘绒膜癌细胞BeWo

YS4332C人T淋巴瘤细胞H9

YS4333C卵巢腺癌细胞OVCAR3

YS4334C人肝癌细胞JHH-7

YS4335C人急性髓系白血病细胞SKNO-1

YS4336C小鼠髓样单核白血病细胞WEHI-3B

YS4337C人睾丸癌细胞NTERA-2 cl.D1

YS4338C人肝癌细胞Huh-1

YS4339C人乳腺导管癌细胞 HCC38

YS4340C人乳腺癌细胞HCC1937

YS4341C人乳腺癌细胞BT474

YS4342C人舌鳞癌细胞SCC-9

YS4343C人小细胞肺癌细胞NCI-H69

YS4344C人多发性骨髓瘤细胞RPMI-8226

YS4345C小鼠血液细胞WEHI-3

YS4346C人乳腺鳞状癌细胞HCC1806

YS4347C人结肠癌细胞HCT-8

YS4348C高转移人肝癌细胞MHCC97-H

YS4349C人高转移肝癌细胞HCCLM3

YS4350C人肺癌腺癌细胞stage4株NCI-H1573

YS4351C人B细胞淋巴瘤SU-DHL-4

YS4352C人弥漫大B淋巴瘤细胞OCI-Ly7

YS4353C人乳腺导管癌细胞HCC1954

YS4354C人乳腺癌细胞BT-20

YS4355C人舌磷癌细胞SCC25

YS4356C人肺腺癌细胞PC-9

YS4357C胰腺腺癌细胞Panc04.03

YS4358C人脑小胶质细胞HMC3

YS4359C小鼠宫颈癌细胞U14

YS4360C人卵巢癌细胞Caov-3

YS4361C牛肾细胞MDBK (NBL-1)

YS4362C人多发性骨髓瘤细胞OPM-2

YS4363C小鼠胰腺癌细胞Panc02

YS4364C人B淋巴瘤细胞Farage

YS4365C结直肠腺癌细胞COLO201

YS4366C小细胞肺癌细胞NCIH526

YS4367C乳腺癌细胞HCC70

YS4368C人卵巢癌细胞IGR-OV1

YS4369C人神经母细胞瘤细胞BE(2)-M17

YS4370C小鼠肝癌细胞Hepa 1-6

YS4371C结肠癌细胞细胞COLO 678

YS4372C大鼠雪旺细胞RSC96

YS4373C小鼠前胃癌细胞 MFCMFC

YS4374C人红白血病细胞 KASUMI-1

YS4375C恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞NK92MI （少量细胞表达CD3）

YS4376C人神经胶质细胞瘤细胞U-251MG

YS4377C人绒毛膜癌细胞JEG-3

YS4378C人咽鳞癌细胞FaDu

YS4379C人弥漫性组织淋巴瘤细胞SU-DHL-2

YS4380C人正常卵巢上皮细胞IOSE-80

YS4381C人膀胱移行细胞癌细胞T24

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