细胞名称：MEF昆明白小鼠胚胎成纤维细胞ATCC

细胞代次：P4

细胞规格：T25瓶（包邮）/2冷冻管（需加干冰运输费）

细胞冻存：无血清冻存液

细胞传代：第一次建议1:2

培养步骤

a、细胞传代:如果未超过80%汇合度时,将瓶装的培养液收集至离心管中,留5ml培养基,放入37℃、5%CO2孵

箱培养;如果细胞密度超80%,即可进行传代培养,

1)对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞

消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞,使之脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液

,补加1-2mL培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的培养基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的细

胞培养箱中培养。

2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2的比例

分到新的含8ml培养基的新瓶中。

方法二:可选择半换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基新瓶

中。

b、细胞冻存:

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml培养液终止消化,再轻

轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心 5min;

3、 弃上清,沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后加入冻存管中。

4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要将细胞转入液氮罐中,则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上

再转入液氮罐中。C、细胞复苏:

1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后

用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3、弃上清,沉淀用5ml培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养; 天,换用新鲜培养

基继续培养。

C、细胞复苏:

1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后

用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3、弃上清,沉淀用5ml培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养; 天,换用新鲜培养

基继续培养。

注意事项：有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入消化液1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养。

收到货后处理：

培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是运输细胞的 办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后

放到超净台内严格无菌操作,将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处

理。显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存( 40x,100x,200x各一张),前三天照片是重要售

后依据,不提供照片默认收到状态良好。(传代后建议一瓶用原瓶的培养基,另外一瓶用自己配的培养基,以便进

行对比培养,换液拧松瓶盖),该细胞的STR鉴定可向客服咨询索取。

YS1042P人乳腺癌成纤维原代细胞

YS1043P人椎间盘纤维环原代细胞

YS1044P人外周血树突状原代细胞(DC原代细胞)

YS1045P人外周血单核原代细胞

YS1046P人表皮成纤维原代细胞

YS1047P人血管外膜成纤维原代细胞

YS1048P人脂肪间充质干原代细胞

YS1049P小鼠肺微血管内皮原代细胞

YS1050P小鼠肺血管平滑肌原代细胞

YS1051P小鼠Ⅱ型肺泡上皮原代细胞

YS1052P小鼠气管上皮原代细胞

YS1053P小鼠气管平滑肌原代细胞

YS1054P小鼠肺成纤维原代细胞

YS1055P小鼠支气管上皮原代细胞

YS1056P小鼠支气管成纤维原代细胞

YS1057P小鼠肺大静脉平滑肌原代细胞

YS1058P小鼠肺大动脉平滑肌原代细胞

YS1059P小鼠肺动脉成纤维原代细胞

YS1060P小鼠胰腺星状原代细胞

YS1061P小鼠腮腺原代细胞

YS1062P小鼠乳腺上皮原代细胞

YS1063P小鼠骨髓基质原代细胞

YS1064P小鼠食管平滑肌原代细胞

YS1065P小鼠肠平滑肌原代细胞

YS1066P小鼠肠黏膜上皮原代细胞

YS1067P小鼠肝实质原代细胞

YS1068P小鼠小肠隐窝上皮原代细胞

YS1069P小鼠肝内胆管上皮原代细胞

YS1070P小鼠胃黏膜上皮原代细胞

YS1071P小鼠肝窦内皮原代细胞

YS1072P小鼠肝星状原代细胞

YS1073P小鼠直肠平滑肌原代细胞

YS1074P小鼠小肠平滑肌原代细胞

YS1075P小鼠结肠平滑肌原代细胞

YS1076P小鼠小肠黏膜上皮原代细胞

YS1077P小鼠子宫内膜上皮原代细胞

YS1078P小鼠卵巢颗粒原代细胞

YS1079P小鼠子宫颈上皮原代细胞

YS1080P小鼠子宫平滑肌原代细胞

YS1081P小鼠卵巢上皮原代细胞

YS1082P小鼠子宫成纤维原代细胞

YS1083P小鼠卵巢成纤维原代细胞

YS1084P小鼠肾实质原代细胞

YS1085P小鼠膀胱平滑肌原代细胞

YS1086P小鼠肾小管上皮原代细胞

更多细胞欢迎咨询我们：MEF昆明白小鼠胚胎成纤维细胞ATCC