细胞名称：黑化大家鼠肺成纤维细胞ATCC

细胞代次：P4

细胞规格：T25瓶（包邮）/2冷冻管（需加干冰运输费）

细胞冻存：无血清冻存液

细胞传代：第一次建议1:2

培养步骤

a、细胞传代:如果未超过80%汇合度时,将瓶装的培养液收集至离心管中,留5ml培养基,放入37℃、5%CO2孵

箱培养;如果细胞密度超80%,即可进行传代培养,

1)对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞

消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞,使之脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液

,补加1-2mL培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的培养基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的细

胞培养箱中培养。

2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2的比例

分到新的含8ml培养基的新瓶中。

方法二:可选择半换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基新瓶

中。

b、细胞冻存:

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml培养液终止消化,再轻

轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心 5min;

3、 弃上清,沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后加入冻存管中。

4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要将细胞转入液氮罐中,则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上

再转入液氮罐中。C、细胞复苏:

1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后

用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3、弃上清,沉淀用5ml培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养; 天,换用新鲜培养

基继续培养。

C、细胞复苏:

1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后

用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3、弃上清,沉淀用5ml培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养; 天,换用新鲜培养

基继续培养。

注意事项：有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入消化液1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养。

YS2504C人肺成纤维细胞

YS2505C人皮肤成纤维细胞

YS2506C人十二指肠腺癌细胞

YS2507C人T淋巴细胞白血病细胞

YS2508CEBV-转化人淋巴细胞（彝族）

YS2509C人非小细胞肺腺癌细胞

YS2510C人小细胞肺癌细胞

YS2511C人脑瘤细胞

YS2512C人皮肤黑色素瘤细胞

YS2513C人肺癌腺癌细胞

YS2514C人甲状腺正常细胞

YS2515C甲状腺乳头状癌细胞株

YS2516C人T淋巴细胞白血病

YS2517C人视网膜周细胞-

YS2518C人口腔角质细胞-

YS2519C大鼠表皮角质细胞(新生)-

YS2520C人胃癌细胞

YS2521C人心脏微血管内皮细胞-

YS2522C人骨骼肌成肌细胞-

YS2523C人视网膜微血管内皮细胞-

YS2524C人脐静脉内皮细胞-

YS2525C人小胶质细胞

YS2526CMR1[derivativeofHB-11048]中国仓鼠X小鼠B淋巴细胞杂交瘤

YS2527C叙利亚仓鼠肾细胞2n=42

YS2528C叙利亚仓鼠胰岛β细胞

YS2529CPC-12大鼠嗜铬细胞瘤细胞（未分化）

YS2530C大鼠肝癌细胞系

YS2531C大鼠肾小球系膜细胞EC

YS2532C大鼠乳腺腺癌细胞系

YS2533C大鼠胰岛细胞

YS2534C大鼠嗜碱性粒细胞性白血病细胞

YS2535CRMSC-bmWistar大鼠骨髓MSC细胞Wistar大鼠骨髓间充质干细胞

YS2536CRMSC-bmSD大鼠骨髓MSC细胞

YS2537C大鼠胰岛素瘤细胞INS-1

YS2538C大鼠/小鼠神经元融合细胞

YS2539C大鼠肝星状细胞

YS2540C大鼠小肠引窝上皮细胞

YS2541C黑化大家鼠肺成纤维细胞

YS2542C大鼠胚肌细胞

YS2543C大鼠胚皮肤成纤维细胞

YS2544C大鼠皮肤成纤维细胞

YS2545C大鼠血管平滑肌细胞

YS2546C小鼠视网膜神经节细胞株

YS2547C鼠胸腺激酶缺陷细胞株

YS2548C小鼠杂交瘤细胞

YS2549C小鼠肿瘤细胞系

YS2550C小鼠乳腺癌细胞系

YS2551C小鼠成纤维细胞系

YS2552C小鼠黑色素瘤细胞系

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