细胞名称：ROS17/2.8大鼠成骨细胞ATCC

细胞代次：P4

细胞规格：T25瓶（包邮）/2冷冻管（需加干冰运输费）

细胞冻存：无血清冻存液

细胞传代：第一次建议1:2

培养步骤

a、细胞传代:如果未超过80%汇合度时,将瓶装的培养液收集至离心管中,留5ml培养基,放入37℃、5%CO2孵

箱培养;如果细胞密度超80%,即可进行传代培养,

1)对于贴壁细胞,传代可参考以下方法:

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%ydbm消化液约1-2ml至培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞

消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上培养基终止消化。

3.轻轻吹打细胞,使之脱落后吸出,然后将悬液转移至15ml离心管中,在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液

,补加1-2mL培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2的比例进行分瓶传代(两个T25瓶),补充新的培养基至5-8ml/瓶, 放入到37℃、5%CO2的细

胞培养箱中培养。

2、对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM条件下离心8-10分钟,弃上清液,补加1-2ml培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2的比例

分到新的含8ml培养基的新瓶中。

方法二:可选择半换液方式,弃半数培养基后,将剩余细胞悬起,将细胞悬液按1:2比例分到新的含8ml培养基新瓶

中。

b、细胞冻存:

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一次;

2、添加0.25%消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml培养液终止消化,再轻

轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,1000rpm离心 5min;

3、 弃上清,沉淀细胞加入1ml的雅吉生物无血清冻存液(货号:C7001),混匀后加入冻存管中。

4、 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱即可,如后期要将细胞转入液氮罐中,则需在-80℃冰箱 中存放24小时以上

再转入液氮罐中。C、细胞复苏:

1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后

用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3、弃上清,沉淀用5ml培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养; 天,换用新鲜培养

基继续培养。

C、细胞复苏:

1、从液氮中取出细胞冻存管(注意佩戴防护面具),快速将其置入 37℃水浴中解冻, 直至冻存管中无结晶,然后

用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

3、弃上清,沉淀用5ml培养基重悬,接种至T25培养瓶,放于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养; 天,换用新鲜培养

基继续培养。

注意事项：有些细胞比较特殊，如贴壁不牢，在运输过程中发生容易细胞脱落，这是正常现象。请将培养瓶所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5min，收集上清作过渡培养（后期对比培养），沉淀加入消化液1-2ml，轻轻吹打，重悬，消化1-2分钟后，加5ml培养基终止反应。再离心，弃上清，加1-2ml培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25），补充新的培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂细胞培养箱中培养。

收到货后处理：

培养至良好状态后灌满培养液并封好瓶口是运输细胞的 办法。收到细胞用75%酒精喷洒整个细胞瓶,消毒后

放到超净台内严格无菌操作,将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后再做处

理。显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存( 40x,100x,200x各一张),前三天照片是重要售

后依据,不提供照片默认收到状态良好。(传代后建议一瓶用原瓶的培养基,另外一瓶用自己配的培养基,以便进

行对比培养,换液拧松瓶盖),该细胞的STR鉴定可向客服咨询索取。

YS2164CHHFK人毛囊角质细胞

YS2165CHUC人尿道上皮细胞

YS2166CSNU449人肝癌细胞

YS2167CA鼠主动脉平滑肌细胞

YS2168CVMM39人黑色素瘤细胞

YS2169CVMM5A人黑色素瘤细胞

YS2170C3LL小鼠肺癌细胞

YS2171CDCS人树突状细胞

YS2172CRL人B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞

YS2173CRCS大鼠软骨肉瘤细胞

YS2174CROS17/2.8大鼠成骨细胞

YS2175CNCI-H23人非小细胞肺癌细胞

YS2176CNKM-1人白血病细胞

YS2177COCI-AML2人类急性髓细胞性白血病

YS2178CJ-111人单核细胞白血病细胞

YS2179CCESS人急性髓系白血病细胞

YS2180CMKN45人低分化胃癌细胞

YS2181CME-1人类急性髓细胞性白血病细胞

YS2182CNB-4人急性早幼粒白血病细胞

YS2183CRSC-364大鼠滑膜细胞

YS2184CSF767人脑瘤细胞

YS2185CRAEC大鼠主动脉血管内皮细胞

YS2186CRS1大鼠皮肤成纤维样细胞

YS2187CC518大鼠膝关节退变软骨细胞

YS2188CUMUC3人膀胱癌细胞

YS2189CCAL62人甲状腺癌细胞

YS2190CA101D人黑色素瘤细胞

YS2191CBT20人乳腺癌细胞

YS2192CHVSMC人血管平滑肌细胞

YS2193CHS766T人胰腺癌细胞

YS2194CRBMVEC大鼠脑微血管内皮细胞

YS2195CHRCEC人视网膜微血管内皮细胞

YS2196CHSC-2人口底癌细胞

YS2197CSGC7901人低分化胃癌细胞

YS2198CWEHI-3B小鼠髓样单核白血病细胞

YS2199COVHM小鼠卵巢癌

YS2200CQBI-293A腺病毒包装人胚肾细胞

YS2201CHOCF人脉络膜成纤维细胞

YS2202ChREC人视网膜内皮细胞

YS2203CHRMC人肾系膜细胞

YS2204COCI-LY18人B细胞淋巴瘤细胞

YS2205COCI-AML4人急性髓系白血病细胞

YS2206CPT67小鼠逆转录病毒包装细胞

YS2207CTH1小鼠调节T细胞

YS2208CROMAS人Burkkit淋巴瘤细胞

YS2209CMARC-145猴肾细胞

YS2210CNCI-H187人视网膜母细胞瘤细胞

YS2211CHM1900人小胶质细胞

YS2212CTregs小鼠调节T细胞

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