豚鼠胃动蛋白2(GKN2) ELISA 试剂盒

· 产品规格：96T/48T

· 实验方法：夹心法

· 检测范围：78-5000pg/mL

· 检测限：34.2pg/mL

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· 离开了细胞培养皿，还能愉快做实验吗

· 培育皿一般用玻璃或塑料制成，是培育微生物或细胞培育的常用试验耗材，一般玻璃的能够用于植物资料、微生物培育和动物细胞的贴壁培育也可能用到。塑料的可能是聚乙烯资料的，合适试验室接种、划线、分离细菌的操作，能够用于植物资料的培育。培育皿易碎，在清洗和运用时要当心轻拿轻放，运用完后要及时清洗洁净，存放在安全、固定的方位。

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· 培育皿的清洁：

· 1、浸泡：新的或用过的玻璃器皿要先用清水浸泡，软化和溶解附着物。新玻璃器皿运用前得先用自来水简略冲刷，然后用5%盐酸浸泡过夜；用过的玻璃器皿往往附有许多蛋白质和油脂，干枯后不易冲刷掉，故用后应立即浸入清水中备冲刷。

· 2、冲刷：将浸泡后的玻璃器皿放到洗刷剂水中，用软毛刷重复冲刷。不要留死角，并避免损坏器皿外表的光洁度。将冲刷洁净的玻璃器皿洗净、晾干，备浸酸。

· 3、.浸酸：浸酸是将上述器皿浸泡到清洁液中，又称酸液，通过酸液的强氧化作用铲除器皿外表的可能残留物质。浸酸不该少于六小时，一般过夜或更长。放取器皿要当心。

· 4、冲刷：冲刷和浸酸后的器皿都必须用水充沛冲刷，浸酸后器皿是否冲刷的洁净，直接影响到细胞培育的胜败。手艺洗刷浸酸后的器皿，每件器皿至少要重复“灌水－倒空"15次以上，最后用重蒸水浸洗2－3次，晾干或烘干后包装备用。

· 培育皿运用留意事宜：

· 1、运用前通过清洁消毒，培育皿清洁与否对作业影响较大，可影响培育基的酸碱度，若有某些化学药品的存在，会按捺细菌成长。

· 2、新购的培育皿应先用热水冲刷，再置于质量分数为1%或2%的盐酸溶液中浸泡数小时，使游离碱性物质除掉，再用蒸馏水冲刷2次。

· 3、若要培育细菌，再用高压蒸气(一般6.8*10的5次方Pa高压蒸气)，120℃的温度下30min灭菌，置室温中枯燥，或用干热灭菌，就是将培育皿置于烘箱内，温度控制在120℃左右的情况下保持2h，即可杀死细菌的胞牙。

· 4、通过消毒的培育皿才干接种培育运用。

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· ELISA试剂盒里都包含了哪些？

· 一、浓缩

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· 由于净化进程中引入的溶剂，可能会下降待测组分的浓度或许不适宜直接分析，需求去除悉数有机溶剂。即试剂盒前处理进程中把样本在60℃氮气下吹干，再用复溶液溶解单调残留物。

· 浓缩办法：氮气吹干除杂、压缩空气吹干除杂。

· 二、均质

· ①组织样本：肉、肝食品类切细，用绞肉机反复绞碎，混合均匀。

· ②水产样本：去除样品的非食用部分，食用部分切细，用均质器均浆；材料表面较脏时,需适当用蒸馏水清洗。

· ③蛋类：鲜蛋去壳，蛋黄和蛋白充分混匀。

· ④生果、蔬菜类：先用水洗去泥沙，ELISA试剂盒然后除去表面的水分，取食用部分。

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细胞株与细胞系有何区别呢？又有何联系呢？

今日我们就详细讲解下细胞株与细胞系。

传代培育的细胞是细胞系；细胞株就是从细胞系挑选出来的 有特别特点的 比如无线增值的。

细胞株(Cell Strain)

        经过选择法或克隆形成法从原代培育物或细胞系中取得具有特别性质或标志物的培育物称为细胞株(Cell Strain)，也就是说，细胞株是用单细胞别离培育或经过挑选的办法，由单细胞增殖形成的细胞群。细胞株的特别性质或标志必须在整个培育期间一直存在。

细胞系（cell line）

        原代培育物经传代成功后即为细胞系(cell line)， 由原先存在于原代培育物中的细胞世系所组成。如果不能持续传代，或传代次数有限， 可称为有限细胞系(finite cell line)， 如能够接连培育， 则称为接连细胞系(continuous cell line)， 培育50代以上并无限培育下去。

3.竞争法ELISA

小分子抗原与半抗原的检测方法常用竞争法ELISA，待检样本中抗原越多，被结合的酶标抗原的量会减少，彼此形成竞争负相关体系，显色物质也就越少，根据显色物质的比例可拟合得到待测抗原含量。

4.其他方法

a.免疫抑制法测ELISA：固相包被抗原，被检样本对底物显色的抑制程度与样本中所含抗原的量成正比，二者之差为待测抗原含量，原理类似与竞争法ELISA。

b.阻断ELISA：目的检测特异性抗体，也称为竞争ELISA，原理为固相包被抗原，待测样本与一抗酶标竞争孵育，待检样本中抗体越多，显色越浅，反则反之。非洲猪瘟病毒抗体检测试剂盒中涉及该法。

c.此外有用于检测IgM抗体的抗体捕捉ELISA，有固相载体改变的Dot-ELISA（硝酸纤维素膜）和C-ELISA（涤纶布），还有技术分类的TRFIA和多因子检测等。

ELISA的评估

ELISA Kit的多指标决定了产品质量的优劣，优秀的试剂盒需要对如下6大项指标进行测定评估，分析如下：

  1、准确性

ELISA Kit的多指标决定了产品质量的优劣，优秀的试剂盒需要对如下6大项指标进行测定评估，分析如下：

a.回收率：测定试剂盒对数据真实性的校准，过高或偏低会产生加样和假性性的失准数据。

b.线性：测定试剂盒稀释液与样本微环境的的准确性，过高或偏低均会出现测定的偏差。

  2、精确度

a.板内精确度：评价单次实验中，同一个已知浓度不同复孔的差异。

b.板间精确度：评价同一样本，多次实验的差异。

 3、精密度

检测限：能显著区分空白信号的最小信号值对应的浓度，用于评估试剂盒的灵敏度，值越低试剂盒灵敏度越高。

  4、特异性

a.交叉反应：评判特异性，不同分子与试剂盒抗体结合能力，交叉反应越大，特异性越差。

b.抗干扰能力：同源物的干扰，内源性物质对检测系统的干扰。

  5.天然样本检测性

对天然样本及合适的样本类型检测分析。对天然样本类型确定，避免假阳性或假阴性结果。

  6、稳定性

试剂盒时效性和稳定性是对指标检测的重要保障。稳定性越高，试剂盒存储时间越久。

ELISA的应用

ELISA技术是特定靶标蛋白质定量的金标准，提供快速，稳定且易于分析的结果。可以对生物大分子/小分子的定量，对亲和力测定评价或者筛选，还可对重组蛋白或细胞因子进行活性比对分析等运用。常应用于细胞因子，趋化因子，生长因子等检测，同时应用于癌症、干细胞、免疫学、神经学和信号转导等研究领域的靶标。

ELISA实验所用试剂-酶的底物与最后步骤详解介绍！

1，酶的底物

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HRP的底物

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HRP催化过氧化物的氧化反应，代表性的过氧化物为H2O2，其反应式如下：DH2+ H2O2 D+ H2O

　　上式中，DH2为供氧体，H2O2为受氢体。在ELISA中，DH2一般为无色化合物，经酶作用后成为有色的产物，以便作比色测定。常用的供氢体有邻苯二胺(O-phenylenediamine,OPD)、四甲基联苯胺(3,3',5,5'-tetramethylbenzidine,TMB)和ABTS[2,2'-azino-di-(3-ethylbenziazobine sulfonate-6)]。

　OPD氧化后的产物呈橙红色，用酸终止酶反应后，在492nm处有最高吸收峰，灵敏度高，比色方便，是HRP结合物的底物。OPD本身难溶于水，OPD·2HCL为水溶性。曾有报道OPD有致异变性，操作时应予注意。OPD见光易变质，与过氧化氢混合成底物应用液后更不稳定，须现配置现用。在试剂盒中，OPD和H2O2一般分成二组分，OPD可制成一定量的粉剂或片剂形式，片剂中含有发泡助溶剂，使用更为方便。过氧化氢则配入底物缓冲液中，有制成易保存的浓缩液，使用时用蒸馏水稀释。先进的ELISA试剂盒中则直接配成含保护剂的工作浓度为0.02% H2O2的应用液,只需加入OPD后即可作为底物应用液。

　　TMB经HRP作用后共产物显蓝色，目视对比鲜明。TMB性质较稳定，可配成溶液试剂，只需与H2O2溶液混和即成应用液，可直接作底物使用。另外，TMB又有无致癌性等优点，因此在ELISA中应用日趋广泛。酶反应用HCL或H2SO4终止后，TMB产物由蓝色呈黄色，可在比色计中定量，最适吸收波长为405nm。

ABTS虽不如OPD和TMB敏感，但空白值极低，也为一些试剂盒所采用。

　　另一种HRP的底物为3-(4-羟基)苯丙酸[3-(4-hydroxy)phenly propionic acid,HPPA]，经HRP作用后，产物显荧光，可用荧光光度计测量。用于ELISA的优点为可加宽定量测定的线性范围。

　　HRP对氢受体的专一性很高，仅作用于H2O2、小分醇的过氧化物和尿素过氧化物(urea peroxide)。H2O2应用最多，但尿素过氧化物为固体，作为试剂较H2O2方便、稳定。试剂盒供应尿素过氧化物片剂，用蒸馏水溶解后，在底物缓冲液中密闭、低温（2～8℃）可稳定1年。

豚鼠胃动蛋白2(GKN2) ELISA 试剂盒

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AP的底物

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　　AP为磷酸酯酶，一般采用对硝基苯磷酸酯(p-nitrophenyl phosphate,p-NPP)作为底物，可制成片剂，使用方便。产物为黄色的对硝基酚，在405nm波长处有吸收峰。用NaOH终止酶反应后，黄色可稳定一时间。AP也有发荧光底物（磷酸4-甲基伞酮），可用于ELISA作荧光测定，敏感度较高于用显色底物的比色法。

2，洗涤液

　　在板式ELISA中，常用的稀释液为含0.05%吐温20磷酸缓冲盐水。

3，　酶反应终止液

　　常用的HRP反应终止液为硫酸，其浓度按加量及比色液的最终体积而异，在板式ELISA中一般采用2mol/L。

4，阳性对照品和阴性对照品

　　阳性对照品(positive control)和阴性对照品(negative control)是检验试验有效性的控制品，同时也作为判断结果的对照，因此对照品，特别是阳性对照品的基本组成应尽量与检测标本的组成相一致。以人血清为标本的测定，对照品最好也为人血清，因为正常人血清在各种ELISA模式中可产生不同程度的本底。由于大量正常人血甭较难得到，国外试剂盒中的对照品多以复钙人血浆(recalcified human plasma)为原料，即在血浆中加入钙离子，使其中的纤维蛋白质凝固，除去凝块后所得的液体，其组成与血清相似。阴性对照品须先行检测，确定其中不含待测物质。

例如HBsAg检测的阴性对照品中不可含HBsAg，最好抗HBs也是阴性。阳性对照品多以含蛋白保护剂的缓冲液为基质，其中加入一定量的待检物质，此量最好在试剂说明书中标明。加入的量应与试剂的敏感度相称，在测定中得到的吸光值与受检标本吸光值比较，可对标本中受检物质的量有一个粗略的估计。国外检测HBsAg的ELISA试剂盒检测敏感度约为0.5ng/ml，阳性对照品中含量约为10ng/ml。在对照品中一般加入抗生素和防腐剂，以利保存。

5，参考标准品

　　定量测定的ELISA试剂盒（例如甲胎蛋白质癌胚抗原测定等）应含有制作标准曲线用的参考标准品，应包括覆盖可检测范围的4-5个浓度，一般均配入含蛋白保护剂及防腐剂的缓冲液中。