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人前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)ELISA试剂盒

人前蛋白转化酶枯草溶菌素9ELISA试剂盒

试剂盒组成：

试剂盒性能：

 检测范围：5 pg/mL – 160 pg/mL。

 灵敏度：检测浓度小于1.0 pg/mL。

 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 

实验原理:

酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种常用的免疫学检测方法，其基本原理是利用抗原与抗体的特异性结合，通过酶标记的抗体或抗原与相应抗原或抗体结合，产生反应后，加入底物溶液，利用酶促反应产生的颜色变化，进行定量或定性分析。ELISA试剂盒就是根据这个原理制成的，可以用于检测各种生物分子及其相互作用。

样本实验准备:

在收集样本前都必须有一个完整的计划，必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本，及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本，及时分装后冻存在-20℃备用，有条件的，最好-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。

液体类标本:  包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。

1. 血清：

室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

2. 血浆：

应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

3. 尿液：

用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。

4. 细胞培养上清：

检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。

5. 培养细胞

检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

6. 组织标本

切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。

实验步骤:
1. 准备工作
（1）实验前确保试剂盒、标准品、待测样本、酶标板、抗体、底物等处于有效期内，并按照说明书要求配置所需试剂。
（2）准备干净的酶标板，编号后分别加入100μL标准品和待测样本，同时设置空白孔作为对照。
2. 温育
将酶标板密封，置于37℃恒温箱中温育1小时。
3. 洗涤
温育结束后，用洗涤液充分洗涤酶标板，每次洗涤3遍，以去除未结合的抗原或抗体。
4. 加入酶标抗体
洗涤后，加入100μL酶标抗体至每个孔中，轻轻摇动酶标板，使抗体充分结合。
5. 温育
将酶标板再次密封，置于37℃恒温箱中温育30分钟。
6. 洗涤
洗涤酶标板，去除未结合的酶标抗体。
7. 加入底物溶液
加入100μL底物溶液至每个孔中，室温下避光反应15-30分钟。
8. 终止反应
加入100μL终止液至每个孔中，迅速混匀，终止反应。
9. 测定吸光度值
用酶标仪在波长450nm处测定各孔的吸光度值。

结果分析:
根据标准品浓度与吸光度值绘制标准曲线，通过线性回归方程计算待测样本中PCSK9的浓度。同时，可通过计算样本的OD值与标准曲线的相关性，判断样本的PCSK9浓度是否在正常范围内。

注意事项:
1. 实验过程中要保持酶标板的清洁干燥，避免污染。
2. 每次洗涤酶标板时，要确保洗涤液充分接触每个孔壁，以去除未结合的抗原或抗体。
3. 在加入底物溶液和终止液时，要确保溶液覆盖整个孔面，避免出现气泡。
4. 实验过程中要保持室内温度和湿度的恒定，以确保实验结果的准确性。

合作单位:

中国医科大学、复旦大学、北京大学、贵阳医学院、中国农业大学

天津疾控中心、江南大学、山东大学、青岛大学、香港大学

云南省产品质量监督检验研究院

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