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人 CD80 分子（CD80）ELISA 试剂盒

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人 CD80 分子（CD80）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的人 CD80 分子（CD80）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

试剂盒组成

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、5、10、20、40、80 ng/ml

样品收集、处理及保存方法

1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。

3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。

5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

1. 酶标仪（450nm）

2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒温箱

人 CD80 分子（CD80）ELISA 试剂盒

操作注意事项

1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶溶解后再使用。

2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。

3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。

4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。

5.  所有液体组分使用前充分摇匀。

试剂的准备

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。

2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步骤

1. 准备工作

（1）将试剂盒从冰箱中取出，放置至室温；

（2）准备所需的试剂和样品；

（3）将酶标板用洗涤液清洗干净。

2. 包被抗原

（1）将抗原按照说明书要求稀释后，加入酶标板孔中，每孔100μL；

（2）将酶标板轻轻摇晃，使抗原充分覆盖酶标板孔底部；

（3）将酶标板放入湿盒中，4℃孵育过夜。

3. 洗涤和干燥

（1）取出酶标板，用洗涤液清洗5次，每次清洗时间为1分钟；

（2）用吸水纸轻轻吸干酶标板表面的水分。

4. 加样和孵育

（1）在每个酶标板孔中加入100μL待测血清；

（2）将酶标板轻轻摇晃，使血清充分覆盖抗原；

（3）将酶标板放入湿盒中，37℃孵育1小时。

5. 洗涤和干燥

（1）取出酶标板，用洗涤液清洗5次，每次清洗时间为1分钟；

（2）用吸水纸轻轻吸干酶标板表面的水分。

6. 加酶标抗体

（1）在每个酶标板孔中加入100μL酶标抗体；

（2）将酶标板轻轻摇晃，使酶标抗体充分覆盖抗原；

（3）将酶标板放入湿盒中，37℃孵育1小时。

7. 洗涤和干燥

（1）取出酶标板，用洗涤液清洗5次，每次清洗时间为1分钟；

（2）用吸水纸轻轻吸干酶标板表面的水分。

8. 加底物显色

（1）在每个酶标板孔中加入100μL底物溶液；

（2）将酶标板轻轻摇晃，使底物溶液充分覆盖抗原；

（3）将酶标板放入湿盒中，37℃孵育15-30分钟。

9. 终止反应并测量吸光度值

（1）在每个酶标板孔中加入50μL终止液；

（2）立即用酶标仪测量各孔的吸光度值。

结果判断

绘制标准曲线：在Excel工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应OD值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

1.  准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。

2.  灵敏度：检测浓度小于1.0 ng/ml。

3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

5.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6个月

免责声明

1.   试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验，否则所产生的一切后果，由实验者承担，本公司概不负责。

2.   严格按照说明书操作，实验者违反说明书操作，后果由实验者承担。