目录:柏莱源（天津）生物科技有限公司>>生物试剂>>试剂盒kit>> HG-P001HIV-1 p24 ELISA 检测试剂盒
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 96T |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 生物产业,制药/生物制药 |
货号： HG-P001
本品采用双抗夹心法检测样本中 HIV-1 p24蛋白，将HIV-1 p24特异性单克隆抗体预包被在微孔板上，将标准品与待测样本加入到已包被的反应孔内进行孵育。存在的 HIV-1 p24 蛋白会定量的与微孔板中的抗体结合，洗涤除去未结合物，加入生物i素标记的抗p24 抗体，最后加入亲和素标记 HRP，形成抗体-抗原-生物i素抗体-酶标亲和素复合物，通过TMB显色程度指示样品中蛋白含量。使用前请仔细阅读说明书并检查试剂盒组分。
检测范围： 6.25 - 200 pg/mL
定 量 限： 6.25 pg/mL
检 测 限： 3.125 pg/mL
精 密 度： CV%≤10% RE%≤±15%
96T
适用于快速检测任何基于HIV-1的慢病毒的p24蛋白含量测定。
| 组分 | 规格 | 配制 |
| HIV-1 p24 Coated Plate(包被酶标板) | 8孔×12条 | 即用型 |
| Anti-p24-Biotin(检测抗体100x) | 150μL×1管 | 1:99用20%CS稀释缓冲液稀释 |
| Streptavidin HRP(酶结合物100x) | 150μL×1管 | 1:99用20%CS稀释缓冲液稀释 |
| HIV-1 p24 Standard(标准品) | 30μLx1管(0.48mg/mL) | 按建议稀释方式操作 |
| Lysis Buffer(裂解液) | 1.5mL×1管 | 即用型 |
| 20%CS Buffer | 25mL×1瓶 | 即用型 |
| Sample Diluent Buffer(样品稀释液) | 50mL×1瓶 | 即用型 |
| 20×PBST Wash Buffer(20×PBST洗液) | 50mL×1瓶 | 1:19用去离子水稀释 |
| Color Reagent A(底物显色液A) | 7mL×1瓶 | 即用型 |
| Color Reagent B(底物显色液B) | 7mL×1瓶 | 即用型 |
| Stop Solution(终止液) | 7mL×1瓶 | 即用型 |
| 封板膜 | 5张 | 即用型 |
| 说明书 | 1份 | 即用型 |
备 注:检测抗体、酶结合物、标准品和 20% CS Buffer -20℃保存，其他组分 2~8℃避光保存，有效期 12 个月。
◆酶标仪
◆去离子水
◆恒温培养箱
◆全新滤纸
◆微量加液器及吸头
◆涡旋振荡器
试剂配制
1.平衡：将所需试剂移到室温（18~25℃）平衡30分钟。
2.配液：
①1×PBST洗涤液：计算实验所需工作液体积，取适量20×PBST洗液，用去离子水1：19稀释稀释，混匀后备用。
②检测抗体及酶结合物工作液:计算实验所需工作液体积，取适量生物i素抗体或酶洁合物用 20% CS Buffer1：99稀释，充分混匀备用。
③准品及样品使用样品稀释液进行稀释。
3.标准品稀释:标准品第一个中间梯度（Pre-1）-20°C可存放 1-7 天。
| 管号 | 标准液浓度 (pg/mL) | 标准液体积 (μL) | 稀释液体积 (μL) | 总体积 (μL) | 终浓度 (pg/mL) | 剩余体积 (μL) |
| Pre-1 | 480000000 | 5 | 495 | 500 | 4800000 | 490 |
| Pre-2 | 4800000 | 10 | 470 | 480 | 100000 | 475 |
| Pre-3 | 100000 | 5 | 45 | 50 | 10000 | 30 |
| Pre-4 | 10000 | 20 | 180 | 200 | 1000 | 80 |
| 7 | 1000 | 120 | 480 | 600 | 200 | 300 |
| 6 | 200 | 300 | 300 | 600 | 100 | 300 |
| 5 | 100 | 300 | 300 | 600 | 50 | 300 |
| 4 | 50 | 300 | 300 | 600 | 25 | 300 |
| 3 | 25 | 300 | 300 | 600 | 12.5 | 300 |
| 2 | 12.5 | 300 | 300 | 600 | 6.25 | 600 |
| 1 | / | / | 300 | 300 | 0 | 300 |
操作步骤
1.使用前，将所有试剂充分混匀，避免产生气泡。
2.根据实验孔数量，确定所需的板条数目，剩余板条放回含干燥剂的铝箔袋，密封。
3. 加样：每孔加入10uL 裂解液，再加入90uL 标准品、样品稀释工作液、阴性对照至相应孔中。用封板膜封板后置 37℃恒温震荡培养箱，200-300rpm，温育60分钟。
4. 洗涤：弃去各孔内液体，用1XPBST洗涤液注满微孔（300μL/孔），静置 30 秒后弃去孔内液体；重复3次，每一次洗板完成后在滤纸上拍干。
5. 加生物i素检测抗体工作液：每孔加生物i素检测抗体工作液 100uL，用封板膜封板后置 37℃恒温震荡培养箱，200-300rpm，温育 60 分钟。
6. 洗涤：弃去各孔内液体，用1XPBST洗涤液注满微孔（300uL/孔），静置 30 秒后弃去孔内液体；重复3次，每一次洗板完成后在面巾纸上拍干。
7. 加酶结合物工作液: 每孔加酶结合物工作液 100uL，用封板膜封板后置 37℃恒温震荡培养箱，200-300rpm，温育 60分钟。
8. 洗涤：弃去各孔内液体，用1XPBST洗涤液注满微孔（300uL/孔），静置 30 秒后弃去孔内液体；重复3次，每一次洗板完成后在面巾纸上拍干。
9. 显色：每孔分别加底物显色液A50uL，底物显色液B50uL，轻微振荡混匀后用封板膜封板置 25℃避光显色 10 分钟。
10. 测定：每孔加终止液50uL，轻微混匀。选择酶标仪主波长450nm，参考波长630nm，测定各孔吸光值（OD 值）。
结果处理
本产品建议采用四参数的拟合方式进行线性拟合及计算。
1. 标准曲线OD处理（见下例，仅为示例，具体以实际测定为准）
| 标准品浓度(pg/mL) | O D 值 ( 1 ) | O D 值 ( 2 ) | 平均值 |
| 200 | 2.846 | 2.841 | 2.844 |
| 100 | 1.965 | 1.979 | 1.972 |
| 50 | 1.110 | 1.189 | 1.150 |
| 25 | 0.636 | 0.582 | 0.609 |
| 12.5 | 0.362 | 0.338 | 0.350 |
| 6.25 | 0.213 | 0.204 | 0.209 |
| 0 | 0.061 | 0.059 | 0.060 |
2. 以标准品理论浓度与对应OD值进行四参数拟合，得到标准曲线（如下图所示）
本试剂仅用于检测样本中 P24 蛋白组分的含量。
1. 若检测具有极i高水平p24 蛋白的样本。含有高水平 p24（即>200pg/mL）的样品必须在测定前进行稀释，以获得准确的p24 值。这类样本可能包括慢病毒上清，通常慢病毒粗毒液建议稀释 5000-40000 倍，成品建议稀释 40000-160000倍。首i次检测建议进行至少3个连续倍数的稀释，以在标准曲线范围内产生至少一个稀释后样品。在进一步分析或稀释前，需充分混合稀释液。每份样品重复分析两次，以确定原始样品中正确的 p24 值。
2. 试剂按标签说明储存，使用前室温（18~25℃）平衡。
3. 预包被酶标板使用前，请平衡至室温（18~25℃）再打开外包装袋，实验中不用的板条立即放回包装中密封，4℃可保存一个月。其余不用试剂应包装好或盖好。
4. 标准品、生物i素及酶结合物体积量很小，使用前请短暂离心，以使管壁或管盖的液体沉积到管底。
5. 实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。
6. 使用前检查试剂盒内各种试剂。试剂稀释、加样和终止反应应充分混匀或摇匀对实验结果尤为重要。
7. 洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在洁净的纸巾上充分拍干，直至看不到水印。勿将纸巾直接放入反应孔中吸水。
8. 底物显色液对光敏感，避免长时间暴露于光下，避免与金属接触影响结果。
9. 本产品为一次性使用的试剂盒，请在效期内使用。
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