目录:柏莱源（天津）生物科技有限公司>>生物试剂>>试剂盒kit>> HG-EA001E1A & SV40LTA 残留DNA检测试剂盒
| 供货周期 | 现货 | 规格 | 100 Reactions |
|---|---|---|---|
| 应用领域 | 生物产业,制药/生物制药 |
货号： HG-EA001
E1A & SV40LTA 残留 DNA 检测试剂盒能快速、特异地检测生物制品中宿主细胞来源的 E1A 和 SV40LTA 的 DNA 残留。
本试剂盒利用荧光探针原理，采用多重 qPCR 方法，检测快速，专一性强，最i低检测限可以达到 40copies/µL。试剂盒配套 E1A&SV40LTA 定量参考品（已完成标准品溯源）。检测范围：4×101copies/µL~4×106copies/µL换算公式：质粒拷贝数（copies/μL）=6.02×1014× 质粒浓度（ng/μL）/（质粒碱基数 ×660）
100 Reactions
| 组分 | 规格 | 存储条件 |
|---|---|---|
| 2× qPCR buffer | 1.6mL×1 管 | -20℃ |
| E1A&SV40LTA Primer&Probe MIX | 550μL×1 管 | -20℃ |
| 定量参考品 1（4×106copies/μL） | 300μL×1 管 | -20℃ |
| 定量参考品 2（4×105copies/μL） | 300μL×1 管 | -20℃ |
| 定量参考品 3（4×104copies/μL） | 300μL×1 管 | -20℃ |
| 定量参考品 4（4×103copies/μL） | 300μL×1 管 | -20℃ |
| 定量参考品 5（4×102copies/μL） | 300μL×1 管 | -20℃ |
| 定量参考品 6（4×101copies/μL） | 300μL×1 管 | -20℃ |
| DNA稀释液 | 1.5mL×3 管 | -20℃ |
存储条件见上表，有效期12个月。
◆ ABI PRISM 7500
◆ FQD-96A（博日）
◆ CFX96(Bio-Rad)
◆ Roche Light Cycler 480
配合不同机型使用时，请注意选择适配的参比染料 ROX
实验前请准备好下列耗材与设备：
◆1.5mL或2mL无菌低吸附离心管
◆ 与PCR仪适配的96孔qPCR板或八联排管
◆ 1000μL，200μL，10μL无菌低吸附带滤芯枪头
◆ 荧光定量PCR仪
◆ 水浴锅/金属浴
◆ 离心机
◆ 震荡器
◆ 各规格移液器（如1000μL，200μL，10μL，2.5μL等）
◆ 磁力架
详见样品前处理试剂盒（货号为HG-CL100）操作说明书。
1. 定量参考品及NCS、NTC的制备
1.1 定量参考品：即用型；
1.2 NTC 的制备：100uL DNA稀释液；
1.3 NCS 的制备：取100μL DNA稀释液与样本一同进行样本前处理；
1.4 加标回收ERC：建议90uL样品+10uL 定量参考品3，也可根据实际情况按照其他方式制备；
2. q-PCR 反应液的制备和加样
2.1 根据反应孔数计算本次所需的 E1A&SV40LTA qPCR Mix 总量：
E1A&SV40LTA qPCR Mix =（反应孔数 +2 或 3）×20μL（2 或 3 为操作损失量）
2.2 根据反应孔数计算本次所需的 qPCR Mix 总量：
qPCR Mix=（反应孔数 +2 或 3）× 15μL（2 或 3 为操作损失量）
2.3 将所需试剂置于冰上融化，轻微振荡混匀，按表 2 所示配制 E1A&SV40LTA qPCR Mix。
| 组分 | 单孔反应(μL) |
| 2× qPCR buffer | 15 |
| E1A&SV40LTA qPCR Mix | 5 |
| 总体积 | 20 |
E1A&SV40LTA qPCR Mix 配制表
3. 将所需试剂置于冰上融化，轻微振荡混匀，按下表所示加样（总体积30μL）：
| 参考品 | 定量参考品1~6各10μL+ qPCR Mix 20μL |
| 阴性对照 | NTC/NCS 10μL+ qPCR Mix 20μL |
| 待测样品 | 待测样品各10μL+ qPCR Mix 20μL |
各反应孔加样示例
4.实验需使用qPCR实验专用的八联管或者96孔板进行反应，需去除反应体系中的气泡，并离心将液体离至管底准备反应。
5.反应孔排版示例
| 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | 11 | 12 | |
| A | ST1 | ST1 | ST1 | S1 | S1 | S1 | ||||||
| B | ST2 | ST2 | ST2 | S2 | S2 | S2 | ||||||
| C | ST3 | ST3 | ST3 | S3 | S3 | S3 | ||||||
| D | ST4 | ST4 | ST4 | |||||||||
| E | ST5 | ST5 | ST5 | |||||||||
| F | ST6 | ST6 | ST6 | ERC -S1 | ERC -S1 | ERC -S1 | ||||||
| G | NTC | NTC | NTC | ERC -S2 | ERC -S2 | ERC -S2 | ||||||
| H | NCS | NCS | NCS | ERC -S3 | ERC -S3 | ERC -S3 |
96孔板排版示例
（以BIO-RAD公司CFX96 qPCR仪为例。）
1.创建实验反应板，点击Select Fluorophores选择荧光FAM；在反应板图表中，选择样品孔，在Sample Type中下拉择Unknow，勾选荧光FAM，Target Name命名为E1A-DNA；勾选荧光CY5，Target Name命名为SV40LTA-DNA；输入每个样品的重复次数及Sample Name。
2.在反应板图表中，选择标曲孔，在Sample Type中下拉选择Standard，勾选荧光FAM，Target Name命名为E1ADNA；勾选荧光CY5，Target Name命名为SV40LTA-DNA；输入每个稀释梯度的重复次数及Sample Name。分别在STD1、STD2、STD3、STD4、STD5、STD6的Concentration一栏赋值为4E+06、4E+05、4E+04、4E+03、4E+02、4E+01（单位为copies/μL）。
3.点击Run界面“Start Run"按钮进行PCR测定。
| Stage1 | 污染消化 | Reps:1 | 50℃ | 2min |
| Stage2 | 预变性 | Reps:1 | 95℃ | 20s |
| Stage3 | 循环反应 | Reps:40 | 95℃ | 3s |
| 60℃ | 30s |
备注：反应体积30μL。程序中60℃ 30s处设置为荧光收集；有些仪器不允许荧光收集步骤设置为30s或更短，使用ABI 7000、ABI 7300及ABI 7500时可改为35s，其他设备可咨询仪器厂家
以BIO-RAD公司CFX96 qPCR仪为例
1. 点击资料分析视窗Quantitation，可读取标准曲线的斜率（Slope）、截距（Intercept）、扩增效率（Effect）、R2。
2. 在视窗Quantitation Data 中，SQ Mean 一栏可读取无模板对照NTC、NCS、待测样本的检测值，单位为fg/μL。
3. 数据可靠性评估：
• 三个平行孔间Ct值差应小于1.0，Ct值大于35的孔除外；
• 阴性对照NTC和NCS的CT值都应大于标曲最i低浓度的CT值或根据实验室自身验证结果设定标准；
• 标准曲线线性相关系数R2≥0.98，扩增效率85%~110%之间；
• ERC回收率在50%~150%之间（加标回收率=ERC/(0.9*样品+0.1*ST3)。
1. 本试剂盒已通过稳定性（冻融等因素）的验证，无需分装。
2. 阴性样品和阳性样品（参考品和待测样品等）的配制环境需区分区域，不可在一个区域内操作，配制人员需穿戴整齐，戴好口罩、手套和穿好洁净服。
3. 注意在不同加样步骤间及时更换吸头，避免交叉污染，避免长时开盖。
4. 试剂盒必须在有效期内使用。
5. 试剂盒内所有组分建议在低温环境融化后使用。
6. 只有严格遵守说明书的操作方法，全部使用本试剂盒配套的试剂才能保证优良检测效果。
7. 尽量在当天完成样本前处理纯化后立即进行后续qPCR检测，以保证检测结果的准确性。
8. 最终的试验结果与试剂的有效性、操作者的操作方法及试验环境密切相关。
9. 公司只对试剂盒本身负责，不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责，请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量，预留充足的样本。
10. 本试剂盒仅供体外研究使用，不用于临床诊断。
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柏莱源（天津）生物科技有限公司的优势：
现货供应：公司库存充足，可快速发货，减少用户等待时间。
效期保障：严格把控产品质量，确保试剂效期新鲜，保障实验结果的可靠性。
专业技术支持：提供详细的实验方案和技术指导，帮助用户优化实验条件，提高实验成功率。
定制化服务：根据用户需求，提供个性化的产品和服务解决方案。
售后保障：完善的售后服务体系，及时解决用户在使用过程中遇到的问题。
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