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一、鸡新城疫抗体检测试剂盒
通用名:鸡新城疫病毒IgG抗体检测试剂盒(酶联免疫法)
英文名:Diagnostic Kit for chicken Antibodies to Newcastle Disease Virus (ELISA)
二、包装规格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒
三、预期用途 鸡新城疫是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种高度接触性传染病,又称亚洲鸡瘟或伪鸡瘟。主要特征是呼吸困难、便稀、神经紊乱、粘膜和浆膜出血。
鸡新城疫抗体试剂盒适用于鸡血清中新城疫病毒特异性抗体的检测,可用于鸡新城疫疫苗免疫效果评价。
四、试剂盒原理
鸡新城疫抗体试剂盒系由预包被新城疫病毒(NDV)抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成,应用酶联免疫法(ELISA)原理检测鸡血清或血浆中新城疫病毒特异性抗体。实验时,在酶标板中加入对照血清和稀释的待检血清,经温育后,若样品中含有新城疫病毒的特异性抗体,则将与酶标板上抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标记物,与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶标记物,在孔中加TMB底物液,与酶反应形成蓝色产物,显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关;加入终止液终止反应后,产物变为黄色;用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值,即可知样品是否含有特异性抗体。
五、鸡新城疫抗体检测试剂盒组成
酶标板、酶标记物、样品稀释液、浓缩洗涤液、底物液A、底物液B、阳性对照、阴性对照
六、储存及有效期
于2~8℃避光保存,有效期为12个月。
包被板开封后请于2~8℃避光保存,避免受潮。使用期限为2个月。
【样品准备】
1.血清/血浆:取动物全血按常规方法制备血清或血浆,要求血清/血浆清亮,无溶血、无污染。样品1周内可于2~8℃保存,长期需置-20℃保存。
蛋黄:取2ml新鲜蛋黄加2ml生理盐水震荡混匀,3000转/分钟离心15分钟,取上清作为样本。
2.待检血清、血浆或已处理蛋黄样本恢复室温、混匀待用。阴、阳性对照不用稀释。
3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解,然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水+1份浓缩洗涤液)。
【检验方法】
1.使用前将试剂盒置室温30分钟,恢复至室温。
2.取所需用量酶标板条,设阴性/阳性对照各2孔,未用的板条尽快密封,2~8℃保存。
3.阴、阳性对照孔分别加入阴、阳性对照50μl;样品孔每孔先加入40μl工作洗涤液,再加入10μl待检样本。
4.每孔加抗体工作液50μl,混匀,盖好盖板膜,置37℃(推荐水浴)避光反应30分钟。
5.甩去孔内液体,每孔加350μl工作洗涤液,静置30秒后弃去,重复洗涤5次,最后一次拍干。
6.每孔加酶标记物100μl,盖好盖板膜,置37℃避光反应30分钟。
7.洗涤,同步骤5。
8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl,混匀盖好盖板膜,置37℃避光反应15分钟。
9.每孔加终止液50μl,混匀,于450nm(可用630nm作参比波长)测定各孔吸光值(A值)。