人群体反应性抗体(PRA)ELISA检测试剂盒定性 返回列表页

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一.   检测原理：试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被HLA特异性抗原的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗原，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中人群体反应性抗体（PRA）的存在与否。

二.   操作步骤：

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；

3.  待测样本孔加待测样本50μL；

4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

三.   人群体反应性抗体(PRA)ELISA检测试剂盒定性性能

1.  准确性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；阴性对照孔OD值平均值≤0.15，说明试验结果有效。

2.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

3.  重复性：板内、板间变异系数均小于15%。

4.  贮藏：2-8℃，避光防潮保存。

5.  有效期：6个月

四.    上海轩泽康生物常测指标推荐如下：（规格分别有48T和96T）
【炎症因子】：肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素1β（IL-1β）、白细胞介素6（IL-6）、转化因子β（TGF-β）、白细胞介素10（IL-10）

6.        【激素类】：（Cortisol）、醛固酮（ALD）、雌二醇（E2）、孕酮（PROG）、睾酮（T）

7.        【疫病检测】：猪口蹄疫病毒（FMDV）、小反刍兽疫（PPR）、新城疫抗体（NDV-Ab）、狂犬病毒抗体（RV Ab）、蓝耳病（PRRS）