禽网状内皮增生病毒(REV)ELISA检测试剂盒 返回列表页

试剂盒采用双抗一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被网状内皮增生病毒抗体的包被微孔中，依次加入标本、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD 值），与CUTOFF值相比较，从而判定标本中网状内皮增生病毒（REV）的存在与否。

禽网状内皮增生病毒(REV)ELISA检测试剂盒 有三个必要的试剂：

【免疫吸附试剂】、【结合物】、【酶的底物】

1）已包被抗原或抗体的固相载体（免疫吸附剂）

2）酶标记的抗原或抗体（结合物/二抗）

3）酶的底物：A+B

4) 阴性对照品和阳性对照品，参考标准品（一抗）

5）结合物和标本的稀释液

6）洗涤液（PBST）

操作步骤:

1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.  设置阴、阳性对照孔和样本孔，阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照各50μL；

3.  待测样本孔先加待测样本10μL，再加稀释液40μL；

4.  随后阴、阳性对照孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

禽网状内皮增生病毒(REV)ELISA检测试剂盒 结果判断

1.  试验有效性：阳性对照孔OD值平均值≥1.00；

阴性对照孔OD值平均值≤0.15。

2.  临界值（Cut off）计算：临界值=阴性对照孔平均值+0.15

3.  阴性判断：样品OD值＜临界值（Cut off），样品为阴性

4.  阳性判断：样品OD值＞临界值（Cut off），样品为阳性