肠癌3D类器官培养基产品说明：肠癌类器官培养基（Intestine Carcinoma Organoid Medium）是一种为促进人源肠癌类器官体外形成和扩增而开发的培养基。它是一种无菌的液体混合系统，含有必需和非必需的氨基酸、维生素、有机和无机化合物、激素、生长因子、微量矿物质等。该培养基的*配方可以提供一个较优的人源肠癌类器官体外培养环境，选择性地促进体外人源肠癌类器官的生长。

‍产品优势：
(1) 培养成功率高

(2) 体外持续扩增

(3) 保持肿瘤特征

(4) 药敏结果与临床数据接近

使用说明：
◉  实验前准备
（1）15mL无菌离心管、1.5mL离心管、24孔细胞培养板、移液器、移液管、无菌枪头等表面消毒后放入超净工作台中紫外照射30 min。
（2）提前30min从4℃冰箱取出肠癌类器官培养基平衡至室温，提前1h从-20℃冰箱取出所需体积的基质胶冰上融化。
◉  肠癌类器官培养
（1）将获取的肠癌原代细胞悬液计数，根据计算好的体积吸取细胞悬液加入预冷的1.5mL离心管中，补齐预冷的肠癌类器官培养基至所需体积。
（2）将预冷后的细胞悬液加入等体积的基质胶中轻轻混匀（全程冰上操作），避免气泡，使肠癌原代细胞终浓度为5× 105个细胞/量升。然后将细胞与基质胶的混合液按照50uL/孔呈半球形点胶干24孔板。
（3）将培养板放入5%CO2 37℃培养箱终至少30min，待基质胶*凝固。沿孔壁每孔缓慢加入500μL预先恢复至室温的类器官培养基，放置5%CO2、37℃培养箱培养。
（4） 3天后镜下观察类器官形成情况粒径大于30~50μm即认为类器官已经形成。
（5）每5天更换一次培养基进行培养，持续观察类器官大小，镜下观察大部分类器官大小均大于30~50μm且大小不再增大即可收集类器官进行后续实验。
◉  肠癌类器官收集

◉  肠癌类器官传代
（1）收集的类器官，加入适量的消化酶，37℃，200rpm消化（具体时间根据类器官大小和数量决定，以肉眼可见颗粒明显减小一半为准，可中间取消化的类器官显微镜观察，类器官消化至3~10个细胞集合体最佳）。
（2）消化*后1500rpm离心3min，弃上清，使用清洗液重悬后1500rpm离心3min;加入预冷的肠癌类器官培养基进行重悬，计数，按照培养步骤操作继续培养。
注意事项：
1.本产品在使用前需平衡至室温。
2.样本需为肿瘤组织，且肿瘤细胞比例越高（>50%），类器官培养成功率越高。3.使用产品时应注意无菌操作，避免污染。
4.为保持本产品的最佳使用效果，不宜将其过夜放置于室温或较高的温度环境中。5.类器官培养过程要轻柔，避免基质胶凝固后散胶。
6.请于保质期内使用本产品，超出保质期，必须放弃使用。
7.本产品仅用于科研用途，不能用于体外诊断。