NCI-H146 人小细胞肺癌细胞（STR鉴定）

简介：细胞表达相对大量的c-myc mRNA，但c-myc DNA序列不扩增。表达c-myb, v-fms, Ha-ras, Ki-ras, N-ras, c-raf 1 mRNAs。该细胞高表达四种生化标记物：神经元特异性烯醇酶(neuron specific enolase)、肌酸激酶的脑同工酶(brain isoenzyme of creatine kinase)、L-DOPA脱羧酶(L-DOPA decarboxylase)和类蛙皮素免疫活性(bombesin-like immunoreactivity)。

细胞特性：

1） 来源：男性，59岁 肺; 来源于转移灶：骨髓

2） 形态：悬浮，多个细胞聚团

3） 含量：>1x106 细胞数

4） 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5)  用途：仅供科研使用。

运输和保存：

干冰运输及复苏好存活细胞

（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的注意事项：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完培来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。

培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640基础培养基                        87%

优质胎牛血清                                                       10%

GlutaMAX-1谷氨/酰胺                                          1%

Sodium Pyruvate丙酮酸钠                               1%

P/S青霉/素-链霉/素                                          1%

注意：该细胞传代时可以通过加入新鲜培养基稀释或者通过离心收集并将细胞重悬浮在新鲜培养基中。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

细胞处理：

1） 冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完培的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完培重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完培的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

NCI-H146 人小细胞肺癌细胞（STR鉴定）

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