蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒说明书

微量法100T/96S

 测定意义：

SP(EC2.4.1.7) 要存在于微生物和植物中，裂解葡萄糖苷键，催化葡萄糖基转移到果糖 木糖 半乳糖和鼠李糖等，合成相应的葡萄糖基 聚糖 外，SP 还能催化氢/醌合成熊果苷，具有ji强的美白效果，在化妆品工业中具有重要应用

测定原理：

SP 能够以磷酸体，催化蔗糖产生 1-磷酸葡萄糖，在葡萄糖磷酸 酶催化6-磷酸葡萄糖，在 6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用还原 NADP+生成 NADPH，导340nm光吸收值增测定 340nm 吸光度增 速率，即可算SP活性                                

自备实验用品及仪器：                                                               

天平温离心机  恒温水浴锅  紫外分光光度  /酶标仪  微  石英比色皿/96 孔板和蒸馏水                                                                                                

试剂组成和配制：                                                                        

提  液  液体 100mL×1 瓶，4℃保存                                                    

缓冲液  液体 10mL×1 瓶，4℃保存                                                      

试剂一  液体 5mL×1 瓶，4℃保存                                               

试剂二  液体 1.5mL×1 支，4℃保存                                                     

试剂         液体 1mL×1 支，4℃保存                                               

试剂四     粉剂 1 支，-20℃避光保存，临用前 1mL 蒸水溶解                           

试剂五     粉剂 1 支，-20℃避光保存，临用前 1mL 蒸水溶解                           

试剂         粉剂 1 支，-20℃避光保存，临用前 2mL 蒸水溶解                           

试剂七  粉剂 1 支，-20℃避光保存，临用前 2mL 蒸水溶解                           

粗酶液提取：                                                                                  

1.      组按照组质g提液体  (mL)  15~10 的比例 建议约0.1g组，入1mL提液 进行冰浴匀浆，然后 10000g，4℃，离心 10min，清测

2.      菌真菌按照胞数104 个提液体mL500~10001 的比例建议500万胞入1mL提液 ，冰浴超声波破碎胞率300w，超声 3         ，间隔7，总时间 3min然后10000g，4℃，离心 10min，清置于冰测       

测定操作表：

1分光光度 /酶标仪预热 30min，调节波长 340nm 2、操作表

SP 活性计算公式：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式

1.    按照蛋白浓度  算

酶活定义  37℃，pH6.8 时，  毫克蛋白质  分钟催化产生 1nmol NADPH                      一个酶活单

ε × d

2.  按照样本质             算

酶活定义  37℃，pH6.8 时，

克样本  分钟催化产生 1nmol NADPH               一个酶活单

ε × d

3.    按照  胞数算

酶活定义  37℃，pH6.8 时，            10⁴ 个  胞  分钟催化产生 1nmol NADPH               一个酶活单

ε × d

A÷  胞数            万个

ε       NADPH 摩尔消光系数，6220 L/mol/cm  d  比色皿光  ，1cm  V

体  ，2mL V 样             应体系中样本体     ，0.2mL     W 样本质  ，g Cpr

总         应体系总

蛋白浓度，mg/mL

T               应时间，2min

b.用 96 孔板测定的计算公式

1.    按照蛋白浓度  算

酶活定义  37℃，pH6.8 时，  毫克蛋白质  分钟催化产生 1nmol NADPH                      一个酶活单

ε × d

3.  按照样本质             算

酶活定义  37℃，pH6.8 时，

克样本  分钟催化产生 1nmol NADPH               一个酶活单

ε × d

3.    按照  胞数算

酶活定义  37℃，pH6.8 时，            10⁴ 个  胞  分钟催化产生 1nmol NADPH               一个酶活单

ε × d

△A÷  胞数            万个

ε      NADPH 摩尔消光系数，6220 L/mol/cm  d  比色皿光  ，0.5cm  V                       总         应体系总

体  ，2mL V 样             应体系中样本体     ，0.2mL     W 样本质  ，g Cpr 蛋白浓度，mg/mL

T               应时间，2min

注意事项：

1.        粉剂-20℃保存，配制好的试剂 3 天内使用完

2.        可选用 BCA 法测定蛋白含  试剂盒测定蛋白含

蔗糖磷酸化酶(SP)测试盒仅供科研！