LightCycler® 480 系统简明操作指南(绝对定量)
(仅供培训教育使用)
LightCycler® 480 PCR仪使用操作中文说明书 点击下载 里面有完整教程
说明:
- 开机前请注意确保室温在 15-32℃,仪器通风散热口不能有物品遮挡影响散热;
- 请选用与罗氏原装耗材高度一致的96孔板或8联管;
- 在操作过程中,切忌戴有粉末的乳胶手套或裸手接触光学透性封板膜或管盖。
一.开机:接通 LC480 与电脑电源,电脑帐号 operator、密码LC480(或用户的自行设定),点击LC480 ,登录帐号user,密码Master01(或用户的自行设定)。
二.开始实验:
- 点击 ,在列表中选择对应的程序,如 H1N1 或 HBV,点击窗口右下角的 ,而后配制好反应体系,封好膜。
- 按压仪器前面板上的多孔板托架弹出按钮,使多孔板托架弹出后放入 PCR 板,再次按压多孔板托架弹出按钮,使多孔板进入仪器。此时,按钮其左侧的两个警示灯都呈现绿 色,即可开始运行实时定量PCR 反应;
- 点击软件界面右下角的 (只有放入板后 Start Run 才显示为蓝色),输入实验文件名保存,点击窗口右下角的 开始实验。
- 对于以前未使用的试剂盒,设置新实验参数,进入 LC480 软件,点击
在 选择对应的实验模式,一般 根据所用试剂盒设置具体控温参数,如逆转录 15 分钟,PCR 循环 40 循环每循环 95 度
10 秒、60 度 30 秒,最后冷却至 40 度 30 秒(请不要更改默认的升降温速率),按如下设置:
- 点击上面窗口的第一个program,在下面窗口的 Target 一列输入所需的逆转录温度,Hold一列输入时间 00:15:00(如下图);
- 回到上面的窗口,点击 添加新 program,在 cycles 一列输入 40,Analysis Mode 选择 ,在下面的窗口点击一次 ,2 行分别设定:95 度 10 秒,60 度 30 秒(请
不要更改默认的升降温速率),在 60 度的选择single;
- 回到上面的窗口,点击 添加新 program,在下面的窗口内设置为 40 度 30 秒(请不要更改默认的升降温速率);
- 完成后点击软件左下方的 下拉箭头,选择 ,输入该程序对应的公司-试剂盒-日期后点击窗口右下角的 ,以备以后调用模板。
四. 设置样品:点击软件左侧的,先点击左上角的 , 接着 在 subset 中 选 择 本 次 实 验 的 子 集 , 然后在
中Sample Name 中输入样品名称,在 Sample Type
中选择样本类型,如待测样本、阳性对照/阴性对照、或者标准品及浓度。
五. 数据分析:
- 实验运行完后点击软件左侧的 进入分析界面,
- LightCycler® 480 PCR仪使用操作中文说明书
- 点击下载 里面有完整教程