一、永生化小鼠肺动脉内皮细胞简介：虽然原代小鼠肺动脉内皮细胞更能真实地反映肺动脉内皮细胞在小鼠体内的生理状态，但是一方面原代分离培养小鼠肺动脉内皮细胞周期长及对技术人员经验要求非常高，另一方面此原代细胞在体外培养生长缓慢，不能传代，这些不利因素制约了原代小鼠肺动脉内皮细胞在实验室的广泛应用
一、永生化小鼠肺动脉内皮细胞简介：
虽然原代小鼠肺动脉内皮细胞更能真实地反映肺动脉内皮细胞在小鼠体内的生理状态，但是一方面原代分离培养小鼠肺动脉内皮细胞周期长及对技术人员经验要求非常高，另一方面此原代细胞在体外培养生长缓慢，不能传代，这些不利因素制约了原代小鼠肺动脉内皮细胞在实验室的广泛应用。我公司的研究团队拥有多年原代细胞分离培养及细胞永生化服务研究经验，成功建立了永生化小鼠肺动脉内皮细胞。
血管内皮细胞主要作用是维持血管的动态平衡。此细胞能合成和分泌凝血和纤溶系统中的活化和抑制因子，同时也能合成和分泌影响着血小板粘附和聚集的某些介质。内皮细胞还可以释放具有调控细胞增殖和血管壁张力功能的分子。肺动脉内皮细胞上的腺苷受体被脂多糖激活后，会引起参与急性肺损伤的病生理过程的IL-6的释放。许多此类以及其他的作用过程可以应用培养的细胞在体外研究进行研究，肺动脉内皮细胞正是这类研究中普遍应用的细胞类型。
本公司生产的永生化小鼠肺动脉内皮细胞采用酶解法和基因转染制备而来，细胞总量约为1×106/T25方瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法
1 、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中静置 2-3 小时， 以稳定细胞状态，然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的培养液（备注： 先使用瓶子中培养液培养及尽快冻存保种细胞， 保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长，以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡） ，最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2 、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液， 用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 10ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞贴壁后， 观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3 、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）用适当量的冻存液（培养液： FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期储存（或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存）。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2）将冻存管中的细胞转移至含 5ml 培养液无菌离心管中，1000rpm 离心 5min ，然后加入 5ml 完全培养液混匀细胞， 将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中， 放置于 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中培养；
3）第二天，换用新鲜培养基继续培养。
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