一、永生化小鼠肝窦内皮细胞简介：虽然原代小鼠肝窦内皮细胞更能真实地反映肝窦内皮细胞在小鼠体内的生理状态，但是一方面原代分离培养肝窦内皮细胞周期长和对实验设备、试剂及技术人员经验要求较高，另一方面此原代细胞在体外的生长增殖能力非常缓慢有限，以至于此细胞不能传代，这些不利因素制约了原代小鼠肝窦内皮细胞在实验室的广泛应用
一、永生化小鼠肝窦内皮细胞简介：
虽然原代小鼠肝窦内皮细胞更能真实地反映肝窦内皮细胞在小鼠体内的生理状态，但是一方面原代分离培养肝窦内皮细胞周期长和对实验设备、试剂及技术人员经验要求较高，另一方面此原代细胞在体外的生长增殖能力非常缓慢有限，以至于此细胞不能传代，这些不利因素制约了原代小鼠肝窦内皮细胞在实验室的广泛应用。我公司的研究团队拥有多年原代细胞分离培养及细胞永生化服务研究经验，成功建立了永生化小鼠肝窦内皮细胞。
肝血窦是相邻肝板之间的腔隙，是一种特殊的毛细血管。肝血窦的窦壁由肝细胞的细胞膜构成，故肝血窦的通透性较大，有利于肝细胞与血流之间进行物质交换。在电镜下观察，肝血窦内皮细胞与肝细胞之间有一狭窄间隙，称窦周隙(Disse腔)。肝窦内皮细胞是肝脏非实质细胞的主要细胞群，由肝窦内皮细胞构成的肝窦壁是全身毛细血管壁中缺乏基膜的毛细血管窗孔，足肝窦内皮细胞特征性的结构。肝窦内皮细胞在调节肝窦血流与周围组织的物质交换中起有效的中枢性的作用，因此肝窦内皮细胞对于维持正常的肝功能起十分重要的作用。同时肝窦内皮细胞在肝脏的生理病理过程中发挥着诸多的重要功能。
本公司生产的永生化小鼠肝窦内皮细胞采用体外灌注和密度梯度离心法和基因转染制备而来，细胞总量约为1×106/T25方瓶，细胞纯度可达95%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法
1 、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中静置 2-3 小时， 以稳定细胞状态，然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的培养液（备注： 先使用瓶子中培养液培养及尽快冻存保种细胞， 保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长，以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡） ，最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2 、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液， 用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 10ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞贴壁后， 观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3 、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）用适当量的冻存液（培养液： FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期储存（或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存）。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2）将冻存管中的细胞转移至含 5ml 培养液无菌离心管中，1000rpm 离心 5min ，然后加入 5ml 完全培养液混匀细胞， 将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中， 放置于 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中培养；
3）第二天，换用新鲜培养基继续培养。
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