一、小鼠气管平滑肌细胞简介 哮喘是一种常见的气道慢性炎症性疾病，目前我国有约2000万人罹患哮喘
一、小鼠气管平滑肌细胞简介
哮喘是一种常见的气道慢性炎症性疾病，目前我国有约 2000万人罹患哮喘。近些年，由于雾霾等空气质量与环境污染程度的日益恶劣，呼吸系统疾病也逐渐成为了范围影响人类健康最严重的慢性疾病之一。据世界卫生组织预测，到2025年，世界上将会有 4 亿人患上哮喘。哮喘发 病 症 状 众 多，早 期 表 现 为 过 敏 性 炎症，后期由于气管平滑肌增生，阻塞气管，导致气道狭窄、气道高反应及气道重塑，患者出现胸闷、气喘等症状，严重时危及生命。因此，对哮喘的发病机理与治疗的研究是至关重要的。在对哮喘发病机制的研究中，气管平滑肌是针对气道阻塞性症状的主要研究目标之一，针对气管平滑肌细胞的形态学观察与细胞增殖速率的测量是在细胞生物学水平研究哮喘发病机制的常用手段。
本公司生产的小鼠气管平滑肌细胞采用酶解法制备而来，细胞总量约为5×105/T25方瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
二、 使用方法
1 、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：
取出 T25 方瓶， 75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中静置 2-3 小时， 以稳定细胞状态，然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的培养液（备注： 先使用瓶子中培养液培养及尽快冻存保种细胞， 保存种子后再尝试自己完全培养液培养观察是否适合此细胞生长，以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡） ，最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。
2 、细胞传代：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液， 用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）弃上清，沉淀细胞用 10ml 培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代， 最后放入 37℃ ,5%CO2 细胞培养箱中培养；
4）待细胞贴壁后， 观察培养结果，之后进行换液培养或传代。
3 、细胞冻存：
1）细胞生长至覆盖培养瓶的 90%面积时，弃 T25 方瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞 3 次；
2）添加 0.25%消化液约 2ml 至培养瓶中 37 度培养箱放置 3-5 分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm/min，离心 5min；
3）用适当量的冻存液（培养液： FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；
4）先将细胞冻存管放置于-20℃ 1h，然后将其移入-80℃过夜， 24h 后转入液氮中进行长期储存（或者按照梯度程序降温模式直接放置-80 度冻存后并转移液氮中长期储存）。
4、细胞复苏：
1）从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具） ，快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁； 2）将冻存管中的细胞转移至含 5ml 培养液无菌离心管中，1000rpm 离心 5min ，然后加入 5ml 完全培养液混匀细胞， 将细胞悬液转移至 T25 培养瓶中， 放置于 37℃ , 5%CO2 细胞培养箱中培养；
3）第二天，换用新鲜培养基继续培养。
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