猪骨髓间充质干细胞（原代） 返回列表页

猪骨髓间充质干细胞（原代）简介：  

骨髓间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层。骨髓间充质干细胞最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。  

本公司生产的猪骨髓间充质干细胞采用密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×105/T25方瓶，CD29、CD44呈阳性；CD45、CD90呈阴性，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。  

猪骨髓间充质干细胞（原代）使用方法：    

1、您收到细胞后，请按照以下方法进行操作：  

取出T25方瓶，75%酒精擦拭培养瓶，拆下封口膜，放入37℃,5%CO2细胞培养箱中静置2-3小时，以稳定细胞状态，然后打开瓶子回收瓶子中培养液作为后续培养此细胞的培养液（备注：先使用瓶子中培养液培养及尽快冻存保种细胞，保存种子后再尝试自己培养液培养观察是否适合此细胞生长，以免使用自己培养液不适合细胞生长造成细胞状态不好或死亡），最后按照后面细胞传代步骤进行细胞传代培养。  

2、细胞传代：  

1细胞生长至覆盖培养瓶的90%面积时，弃T25方瓶中的培养液，用PBS清洗细胞3次；  

2添加0.25%消化液约2ml至培养瓶中37度培养箱放置3-5分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm/min，离心5min；  

3弃上清，沉淀细胞用10ml培养基重悬，然后按1:2比例进行分瓶传代，最后放入37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；  

4待细胞贴壁后，观察培养结果，之后进行换液培养或传代。  

3、细胞冻存：  

1细胞生长至覆盖培养瓶的90%面积时，弃T25方瓶中的培养液，用PBS清洗细胞3次；  

2添加0.25%消化液约2ml至培养瓶中37度培养箱放置3-5分钟，倒置显微镜下观察，待细胞基本脱落后加入培养基终止消化，用滴管混匀并将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm/min，离心5min；  

3用适当量的冻存液（培养液：FBS：DMSO=7:2:1）重悬细胞，并放置于冻存管中；  

4先将细胞冻存管放置于-20℃1h，然后将其移入-80℃过夜，24h后转入液氮中进行长期储存（或者按照梯度程序降温模式直接放置-80度冻存后并转移液氮中长期储存）。  

4、细胞复苏：  

1从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁；  

2将冻存管中的细胞转移至含5ml培养液无菌离心管中，1000rpm离心5min，然后加入5ml培养液混匀细胞，将细胞悬液转移至T25培养瓶中，放置于37℃,5%CO2细胞培养箱中培养；  

3第二天，换用新鲜培养基继续培养。