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DH5α-T1大肠杆菌感受态细胞
产品信息：
组成 BC121-01 BC121-02
DH5α-T1 10×100l 20×100l
pUC19 质粒 5l 5l
储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。不适合在液氮中保存。
产品介绍：
DH5α-T1为常规DH5α改进型菌株。缺失核酸酶（endA1）基因，提高质粒的产量和质量；重组酶缺陷型（recA1）减少插入片
段的同源重组概率，保证了插入DNA的稳定性。由于lacZΔM15的存在以及lacIq基因的缺失，故不需要加IPTG，只需要添加X-gal
就可以进行基于α互补原理上的蓝白斑筛选实验。DH5α-T1在基因组tonA区域的突变使菌株获得抵抗T1和T5噬菌体感染的能力。
DH5α-T1感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19质粒检测转化效率高达10 8cfu/μg DNA。
基因型：F- φ80lacZΔM15 Δ(lacZYA-argF)U169 recA1 endA1 hsdR17(rk-, mk+) phoA supE44 thi-1 gyrA96 relA1 tonA
菌株抗性：对氨苄、、、、、和四环素敏感。
质粒转化步骤：（以氨苄抗性的 pUC19 质粒为例）
1. 将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入 1-5μl 含有 1-100ng 的质粒 DNA 到细胞中，用手指管底，轻
轻混匀。
2. 冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动。
3. 42℃热击 60 秒钟，不要晃动。
4. 冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动。
5. 加入 500μl 的室温的 SOC 或 LB 培养基。
6. 置于 37℃摇床中，150-200rpm，复苏培养 60 分钟。
7. 取 50-100μl 菌液涂布在含有氨苄抗性的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板 37℃培养 12-24 小时。
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块，
取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更大的
单克隆菌落。）
注意事项：
1. 化冻的感受态细胞不能长时间放置，影响转化效率；
2. 感受态细胞避免反复冻融；
3. 操作过程要轻柔，避免用移液枪反复吹打；
4. 整个转化过程应注意无菌操作，避免污染。


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