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ArcticExpress(DE3)大肠杆菌感受态细胞
产品信息：
组成 BC218-01
ArcticExpress(DE3) 20×100l
pUC19 质粒 5l
储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。
产品说明：
ArcticExpress(DE3)细胞来源于 BL21-Gold 菌株，属于 Lon 和 OmpT 蛋白酶缺陷型的大肠杆菌 B 菌株。菌株含有抗性
的质粒能稳定表达海洋细菌 Oleispira antarctica 的两个低温分子伴侣 Cpn10 和 Cpn60。这些伴侣蛋白在较低温度（4-12℃）下，比
大肠杆菌 GroEL/GroES 表现出更高的活性, 在低温下可以更好地促进重组蛋白的正确折叠，潜在地增加了可溶性重组蛋白的产率和
活性，克服重组蛋白的错误折叠和不溶性。该菌株又具备λ噬菌体 DE3 基因区，可以表达 T7 RNA 聚合酶，适用于含有 T7 启动子
的原核表达载体（如 pET 等）的高效表达。非 T7 启动子的表达载体（如 pGEX、pMal，pTrc 等载体）也可以在该菌株中表达。
ArcticExpress(DE3)感受态细胞由特殊工艺制成，pUC19 质粒检测转化效率大于 1×107 cfu/μg DNA。
基因型: F – ompT hsdS(rB– mB –) dcm+ Tetr gal λ(DE3) endA Hte (cpn10 cpn60 Gentr )
菌株抗性：具有、四环素抗性。对氨苄、、、、敏感。
质粒转化步骤：
1.将感受态细胞置于冰水浴中化冻。待细胞刚化冻后，加入质粒 DNA 或 5-10μl 连接产物到细胞中，用手指管底，轻轻混匀；
2.冰水浴中放置 30 分钟，不要晃动；
3.42℃热击 60 秒钟，不要晃动；
4.冰水浴中放置 2 分钟，不要晃动；
5.加入 500μl 无菌的 SOC 或 LB 培养基；
6.置于 37℃摇床中，150-200rpm 震荡复苏培养 60 分钟；
7.取 50-100μl 菌液涂布在含有 20ug/ml 的和适当浓度的转化质粒的抗性抗生素的 LB 平板上。待液体吸干后，倒置平板，
37℃培养 12-16 小时。
（平板划线分离法：复苏培养结束后，12000rpm 离心 30 秒钟，弃掉上清，留 100μl 左右的液体，用 200μl 吸头轻轻吹打散菌块，
取 10μl 重悬的菌液分多点滴在平板上，倾斜吸头，用吸头头部的侧面将滴在平板上的液体来回划线。这个方法可以获得更多更大
的单克隆菌落。）
蛋白表达步骤：
1.挑取单菌落，接种到含 5ml 带抗生素的 LB 培养基中；
2.37℃，200rpm 震荡培养细菌至对数生长期（OD600=0.4-0.8）；
3.加入 IPTG 到终浓度为 0.4mM，37℃诱导 2-4 小时或 16℃诱导过夜；
（低温诱导方法：37℃，200rpm 震荡培养细菌到 1-2 个 OD 左右，然后将培养物降温至 10–13°C，低温培养 15 分钟达到平衡，将
IPTG 添加到摇瓶中，最终浓度达到为 0.1-0.5mM 之间。继续诱导培养 12-24 小时。）
4.诱导完成后，离心收集菌体，用合适的方法（如考马斯亮蓝染胶法，Western-Blot 法或酶活性分析法）分析菌体裂解物的总蛋白、
上清和沉淀组分，明确表达产物的表达状况（可溶性或不溶性表达）；
5.大量表达时，可用 10ml 过夜培养物转接到 1L 培养基中，当培养到 OD600=0.4-0.8 时，加入终浓度为 0.4mM 的 IPTG，37℃诱导2-4 小时或 16℃诱导过夜（不同蛋白表达的条件有所不同，需在实验中优化


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