DH10BAC 大肠杆菌克隆感 返回列表页

DH10Bac 大肠杆菌克隆感受态细胞
产品信息：
组成 BC112-01
DH10Bac Competent cells 20×100μl
pUC19（0.1ng/μl） 5μl
储存条件：-70℃保存，避免反复冻融。
产品介绍：
大肠杆菌DH10Bac感受态细胞，适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac系统中同源重组的菌株，用于产生重组
Bacmid。是经特殊工艺制备，使用pUC19质粒检测，转化效率可达107 cfu/μg，-70℃保存几个月转化效率不发
生改变。
基因型：
F-mcrAΔ(mrr-hsdRMS-mcrBC)φ80lacZΔM15ΔlacX74recA1endA1araD139Δ(ara,leu)7697galUgalKλ-rpsLnupG
/pMON14272/pMON7124
产品特点：
DH10Bac 细胞包含亲本 Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124 亲本 Bacmid 包含一个 mini-F 复制子、
抗性基因、att Tn7 位点和 lac Zα-互补因子。辅助质粒包含 tns ABCD 区域，该区域提供了 mini-Tn7
从供体质粒插入亲本 Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如 pFastBac 系列质粒（pFastBac1，pFastBacDual
等）含有 Tn7R 和 Tn7L 同源重组臂，Tn7R 和 Tn7L 之间包含抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、
多克隆位点和 SV40 病毒的 PolyA 加尾信号。当含有靶基因 pFastBac 的重组质粒转化到 DH10Bac 细胞后，发
生重组后就可产生重组 Bacmid，提取纯化重组 Bacmid 转染昆虫细胞 Sf9 或 Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。
此外，DH10Bac细胞中的The φ80dlacZΔM15基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组Bacmid
的蓝白斑筛选。
操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）：
提示

感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。

制备含下面抗生素的 LB 固体平板：
50μg/ml kanamycin、7μg/ml gentamicin、10μg/ml tetracycline、100μg/ml X-gal、40μg/ml IPTG。
1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴
中。（一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用 DNA
体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。)以下实验以 100μl 感受态细胞为例。
2. 向感受态细胞悬液中加入 1-10ng 重组质粒，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置 30 分钟。
3. 将离心管置于 42℃水浴中放置 90 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却 2 分钟，该过程不要摇
动离心管。
4. 向每个离心管中加入 900μl 无菌的 SOC（不含抗生素），混匀后置于 37℃ ,200rpm，摇床振荡培养 4
小时。
5. 用 SOC 培养基进行 10 倍梯度稀释，如分成 3 个稀释梯度 10-1，10-2，10-3。
6. 取 100ul 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体吸收后，倒置平板，37℃培养 24-48 小时。
7. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。
相关试剂及培养基的制备方法：
1. LB 液体培养基：称取 10g Tryptone，5g Yeast Extract 和 10g NaCl 置于 1L 烧杯中。加入约 800ml 的
去离子水，溶解后用 2mol/L 的 NaOH 溶液调节 pH 值至 7.0。加去离子水定容至 1L。分装
后，121℃高压灭菌 20 分钟。
2. SOB和SOC 培养基：称取 20g Tryptone，5g Yeast Extract，0.5g NaCl 置于 1L 烧杯中加入约 800ml 的去
离子水，溶解后再补加 10ml 250mM KCl 溶液，滴加 5M NaOH（约 0.2ml）调 pH 至 7.0。加入
去离子水将培养基定容至 1L。121℃灭菌 20 分钟。使用时加入5ml 灭菌的 2M MgCl2溶液（此种培养
基称为 SOB）。再补加经 0.22μm 过滤除菌的 1M 葡萄糖溶液2ml（此种培养基为 SOC）。
3. 转化复苏细菌用的液体 LB 培养基或 SOC 培养基：可以一次高压 50ml 液体培养基，无菌状态按 1ml
每管分装于高压灭菌的 1.5ml 离心管中，装于自封袋中，冻存于-20℃中，每次用一支。可以极大地避
免培养基污染和减少劳动量。
4. LB 固体选择培养基：100ml LB 液体培养基中加入 1.5g 琼脂粉，摇匀后，121℃高压灭菌 20 分钟。
冷却至 50℃左右时加入相应浓度的抗生素（如 AMP 浓度通常为100μg/ml），混匀后倒在细菌用的无菌
培养皿中，等琼脂凝固后即可使用。
5. IPTG：称量 1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于 40ml 灭菌水，浓度为200mmol/L。用无菌0.22μm
过滤膜过滤除菌。小份分装后，-20℃保存。
6. X-gal：用 DMF（二甲基甲酰胺）配制成 20mg/ml，小份分装（1ml/份）后，-20℃避光保存。


南京万木春生物科技有限公司（Najing Wanmuchun Biotechnology Co., Ltd)面向国内外市场专业研发、生产和销售细胞、 外泌体、ELISA 试剂盒、 抗体、重组蛋白及相关试剂。产品在免疫学、信号转导、代谢、 神经科学等领域内都有科学文献发表，被国内外多所大学、研究机构和药学平台使用并发表文献多达1000多次。我公司凭借优异的产品和完善的服务 体系现已受到广大国内外用户的青睐和认可。
品牌优势
1、产品优势：产品具有高特异性、回收率高、线性好、变异系数低、稳定性好；
2、质量保证：产品质量稳定，每批次产品必须通过 QA、QC 检测才可出库；
3、实力强大： 标准实验室、研发中心，动物房 ；
4、技术支持：技术部 5*8 小时技术问题及时解答；
5、服务周到：发货及时，三个工作日顺丰快递；售后无忧，包退包换。
6、研发、生产科研产品：ELISA 试剂盒：人、大小鼠、牛、兔、山羊、仓鼠、猪、马、鸡、犬、豚鼠、猴、绵羊等多种属1000多种指标；
抗体：兔多抗、鼠单抗种类丰富，一抗 1 万余种，二抗 100 多种；
重组蛋白：多项发明，原核表达系统稳定表达蛋白 1000 余种。


扫一扫，加微信
联系电话：19156044901 （同微信） ，QQ： 3361589519