γ-谷氨酰转肽酶 检测试剂盒（比色法） 返回列表页

γ-谷氨酰转肽酶（γ-GT）检测试剂盒（比色法）

产品货号：BA1790

产品规格：48T/96T

检测原理：

γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。

γ-GT催化谷氨酰对硝基苯胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基苯胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。

试剂组成：

需要而未提供的试剂和器材： 

可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

样本处理：

1. 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织：称取约0.1g样品，加提取液1.0 mL充分研磨，于4℃，10000rpm离心15min，取上清液待测。

3. 血清（浆）：直接检测。

操作步骤： 

※正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min以上（保证无沉淀）。

3. 按顺序加入下列试剂，完成测定。

活性计算： 

1. γ-GT活性计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

活性单位（U）定义：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。

γ-GT（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×10⁶×V反总÷（Cpr×V样）÷T=0.506×ΔA÷Cpr

（2）按样本质量计算：

活性单位（U）定义：25℃或者37℃中，每克组织每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。

γ-GT（U/g 质量）=ΔA÷（ε×d）×10⁶×V反总÷（W÷V提取×V样）÷T=0.506×ΔA÷W

（3）按血清（浆）计算：

活性单位（U）定义：25℃或者37℃中，每毫升血清每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。

γ-GT（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×10⁶×V反总÷V样÷T=0.506×ΔA

（4）按细菌或培养细胞计算：

单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μmol对硝基苯胺为一个活性单位。

γ-GT（U/10⁴cell）=ΔA÷（ε×d）×10⁶÷(500×V样÷V提取) ÷T=0.001×ΔA

V样：加入样品体积，0.1mL；V提取：加入提取液体积：1mL；T：反应时间，2min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：500万细胞；ε：对硝基苯胺消光系数，9870L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应体系总体积，0.001L；10⁶：单位换算系数，1mol=10⁶μmol

注意事项：

1. 培养细胞中γ-GT活性测定时，细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞（防止因为蛋白质变性导致酶失活）。