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供货周期 | 现货 | 规格 | 50T |
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货号 | BA1547-50 | 应用领域 | 化工,生物产业 |
5´-核苷酸检测试剂盒(过碘氧化法)
产品货号:BA1547
产品规格:50T
产品简介:
核酸(nucleic acid)是由许多核苷酸聚合成的生物大分子化合物,是生命的基本物质之一,广泛存在于所有动植物细胞、微生物体内,根据化学组成不同,核酸可分为脱氧核糖核酸(简称DNA)和核糖核酸(简称RNA)。
5´-核苷酸检测试剂盒(过碘氧化法)检测原理是无机磷与钼酸铵形成黄色的磷钼酸铵,随后还原剂把高价钼离子还原成低价钼离子,进而形成蓝色的钼蓝,在一定浓度范围蓝色深浅与磷含量成正比,在660nm处检测吸光度,通过检查标准曲线,获得磷含量。同时为了消除其他无机磷的干扰,测定未经过碘酸氧化的无机磷,予以扣除,即为准确的5´-核苷酸磷。该试剂盒的特点是专一测定5´-核苷酸。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
产品组成:
产品组成 | 50T | 保存条件 |
试剂(A):磷标准(1mg/ml) | 1ml | 4℃ |
试剂(B):样品处理液 | 10ml | 4℃,避光 |
试剂(C):玻璃珠 | 50粒 | 室温,避光 |
试剂(D):H2O2 | 2×1ml | 室温,避光 |
临用前,按E1:E2:E3=3:1:1配制定磷试剂,即配即用。 | ||
试剂(F):过碘酸试剂 | 3ml | 4℃,避光 |
试剂(G):NA assay buffer | 15ml | 室温,避光 |
操作步骤(仅供参考):
1. 稀释标准品:取磷标准(1mg/ml),按磷标准(1mg/ml):蒸馏水=1:99的比例稀释标准品至10μg/ml。取干净离心管或试管,按下表进行标准品浓度的依次稀释,获得不同浓度的多个磷标准。
1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 | |
磷标准(10μg/ml)/ml | 0.1 | 0.2 | 0.3 | 0.4 | 0.5 | 0.6 | 0.7 | 0.8 | 0.9 | 1.0 |
蒸馏水/ml | 0.9 | 0.8 | 0.7 | 0.6 | 0.5 | 0.4 | 0.3 | 0.2 | 0.1 | 0 |
磷含量/(μg/ml) | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 | 9 | 10 |
2. 制备待测样液:取用粗AMP水解液或RNA水解液,作为待测样液。
3. 磷测定:按下表进行操作,依次加入下列溶液,不能颠倒,每加一种试剂,必须充分混匀。如果样品中有无机磷,应同时检测无机磷,并将无机磷扣除。
空白管 | 标准管 | 氧化管 | 未氧化管 | |
蒸馏水 | 1.0 | - | 0.5 | 0.5 |
系列磷标准(0-10号)/ml | - | 0.5 | - | - |
待测样液/ml | - | - | 0.5 | 0.5 |
过碘酸试剂/ml | 0.05 | 0.05 | 0.05 | 0.05 |
NA assay buffer/ml | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
混匀,45℃孵育10min | ||||
NA 显色液/ml | 0.25 | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
混匀,孵育 | ||||
定磷试剂/ml | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
4. 孵育,以空白管调零,比色杯光径1.0cm,分光光度计测定660nm处吸光度(即为A660),分别为A氧化、A未氧化。
计算:
以磷含量(μg/ml)为横坐标,吸光度为纵坐标作图,得标准曲线。氧化管为样液中所有磷的含量,未氧化管为样液未氧化前无机磷的含量,二者只差即为样液中5´-核苷酸磷含量。
按下列公式计算样液中5´-核苷酸的含量:
5´-核苷酸含量(mg/ml)=(CM/31)×(N/1000)
注意事项:
1. 上述低温试剂避免反复冻融,以免失效或效率下降。
2. 待测样本如不能及时测定,应置于2~8℃保存,3天内稳定。
3. 如果样品浓度过高,应用蒸馏水稀释后重测,结果乘以稀释倍数。
有效期:6个月有效。
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