丙二醛（MDA）含量检测试剂盒（微量法） 返回列表页

丙二醛(MDA)含量检测试剂盒（微量法）

正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1066

产品规格：100管/96样

产品内容：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体30mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×2瓶，4℃保存；

MDA检测工作液的配制：用时在每瓶试剂二中加入15mL试剂一，溶解混匀，4℃保存待用。

试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存；

注意事项：MDA检测工作液较难溶解，可以70℃加热，并剧烈振荡以促进溶解。或者通过超声处理以促进溶解。

产品说明：

氧自由基作用于脂质的不饱和脂肪酸，生成过氧化脂质；后者逐渐分解为一系列复杂的化合物，其中包括丙二醛 MDA。通过检测 MDA 的水平即可检测脂质氧化的水平。

丙er醛（MDA）在酸性和高温条件下，可以与硫代ba比妥酸(thiobarbituric acid，TBA)缩合，生成棕红色的san甲川（3,5,5-san甲基恶唑-2，4-er酮），其最大吸收波长在532nm。进行比色后可估测样品中过氧化脂质的含量。但是测定植物组织中MDA时受多种物质的干扰，其中最主要的是可溶性糖，糖与TBA显色反应产物的最大吸收波长在450nm，但532nm处也有吸收。所以同时测定600nm、532nm、450nm下的吸光度，利用532nm与450nm、600nm下的吸光度的差值计算MDA的含量。

由于植物中受蔗糖干扰较大，动物中受葡萄糖干扰较大，所以本试剂盒有针对蔗糖和葡萄糖的两个公式。若所测样品为油脂类物质，则两个公式均可。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、MDA提取：

1、细菌或细胞样品的制备：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每400万细菌或细胞加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织样品的制备：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

二、测定操作：

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，蒸馏水调零。

2、按下表步骤加样：

混合液在100℃水浴中保温30min后（盖紧，防止水分散失），置于冰浴中冷却，10000g，常温，离心10min。吸取200uL上清液于微量玻璃比色皿或96孔板中，测定各样品在450nm、532nm和600nm处的吸光度。

三、MDA含量计算：

a. 按96孔板计算

1、细菌、细胞或动物组织中MDA含量计算

（1）按照蛋白浓度计算

MDA含量（nmol/ mg prot）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）×V总÷（Cpr×V样本）

=5×（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）÷Cpr

（2）按照样品质量计算

MDA 含量（nmol/ g 鲜重）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）×V总÷（W×V样本÷V提取）

=5×（12.9×（A₅₃₂ -A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）÷W

(3) 按照细菌或细胞密度计算：

MDA 含量（nmol/10⁴ cell）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）×V总÷（400÷V提取×V样本）

=0.125×（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-2.58×A₄₅₀）

V总：反应体系总体积，0.5mL；V样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。 W：样品质量，g；400：细胞或细菌总数，400万；V提取：提取液体积，1mL。

2、植物组织中MDA含量计算

（1）按照样品质量计算

MDA含量（nmol/ g鲜重）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.12×A₄₅₀）×V总÷（W×V样本÷V提取）

=5×（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.12×A₄₅₀）÷W

（2）按照蛋白浓度计算

MDA含量（nmol/ mg prot）=（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.12×A₄₅₀）×V总÷（Cpr×V样本）

=5×（12.9×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.12×A₄₅₀）÷Cpr

V总：反应体系总体积，0.5mL；V样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g；V提取：提取液体积，1mL。

b. 按微量比色皿计算

1、细菌、细胞或动物组织中MDA含量计算

（1）按照蛋白浓度计算

MDA含量（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）×V总÷（Cpr×V样本）

=5×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）÷Cpr

（2）按照样品质量计算

MDA含量（nmol/ g鲜重）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）×V总÷（W×V样本÷V提取）

=5×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）÷W

(3) 按照细菌或细胞密度计算：

MDA 含量（nmol/10⁴ cell）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）×V 总÷（400×V样本÷V提取）

=0.0125×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-1.29×A₄₅₀）

V总：反应体系总体积，0.5mL；V样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g；400：细胞或细菌总数，400万；V提取：提取液体积，1mL。

2、植物组织中MDA含量计算

（1）按照样品质量计算

MDA含量（nmol/ g鲜重）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-0.56×A₄₅₀）×V总÷（W×V样本÷V提取）

=5×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-0.56×A₄₅₀）÷W

（2）按照蛋白浓度计算

MDA含量（nmol/ mg prot）=（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-0.56×A₄₅₀）×V总÷（Cpr×V样本）

=5×（6.45 ×（A₅₃₂-A₆₀₀）-0.56×A₄₅₀）÷Cpr

V总：反应体系总体积，0.5mL；V样品：加入样品体积，0.1 mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL。W：样品质量，g；V提取：提取液体积，1mL。