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多酚氧化酶（PPO）检测试剂盒（邻苯二酚微板法）

产品货号：BA1542

产品规格：120T

产品简介：

多酚氧化酶(polyphenol oxidase，PPO)是自然界中分布极广的一种金属蛋白酶，普遍存在于植物、真菌、昆虫的质体中，甚至在土壤中腐烂的植物残渣上都可以检测到多酚氧化酶的活性，多酚氧化酶是一种蛋白体，在茶树生命活动和茶叶加工过程中参与一系列由酶促活动而引起的化学变化，故又被称为生物催化剂。该酶属于细胞木质素合成途径中间的关键酶，研究该酶可以探讨多种生物细胞发育过程中木质素沉积的代谢机理，为减少水果石细胞含量提高其品质提供依据。

尚宝生物多酚氧化酶(PPO)检测试剂盒(邻苯二酚比色法)检测原理是以邻苯二酚作为底物，在酶促反应的最适条件下采用每隔一定时间测定产物生成量的方法，于酶标仪420nm处检测吸光度，以吸光度变化所需酶量进行计算。该试剂盒主要用于植物组织的裂解液或匀浆液、血清等样品中内源性的多酚氧化酶活性，尤其适用于检测水果中多酚氧化酶活性。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1.        蒸馏水

2.        研钵或匀浆器

3.        离心管或试管

4.        低温离心机

5.        酶标板

6.        酶标仪

操作步骤：

1.        准备样品：

①植物样品：取2g植物组织或水果中层果肉加入4ml预冷的PPO Lysis buffer 研磨或匀浆，10000g，4℃离心 15-20min，留取上清液，-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PPO Lysis buffer进行适当匀浆，10000g，4℃离心15-20min，取上清液，-20℃冻存，用于多酚氧化酶的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高活性的多酚氧化酶，可以使用PPO Lysis buffer稀释进行恰当的稀释。

2.        PPO加样：按照下表设置对照孔、测定孔，注意：对照孔、测定孔中为同一待测样品，但对照孔中为提前加热煮沸5min的样品。溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的PPO活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，求平均值。

3.        PPO 检测：立即以酶标仪，以对照孔为对照，测定420nm处对照孔的吸光度(A测定0 )；1min后立即测定 420nm 处测定孔的吸光度(A测定1)。

计算：

PPO活性单位的定义：在该实验条件下，每1min吸光度变化0.01所需酶量为一个活性单位。

组织样本PPO(U)={(A_测定1 -A_测定0 )×V _T }/(W×V _S ×0.01×t)

式中：A_测定 1 =反应1min后测定孔的吸光度

A_测定 0 =加入PPO Assay buffer立即测定的测定孔吸光度

W=组织样本的重量(g)

V_T =提取酶液的总体积(ml)

V_S =测定时所用酶液体积(ml)

液体样本PPO(U)=(A_测定1 -A_测定0 )/(0.01×t)

式中：A_测定1 =反应1min后测定孔的吸光度

A_测定0 =加入PPO Assay buffer立即测定的测定孔吸光度

t=反应时间

注意事项：

1.        待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2.        PPO酶液提取时，注意低温操作，防止酶活性。4℃保存2-3天，亦可-20℃保存。

3.        以煮沸的酶液为对照时，酶要充分失活。

4.        如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定；每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。

有效期：6个月有效。