谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性检测试剂盒 返回列表页

谷胱甘肽S-转移酶（GST）活性检测试剂盒（紫外分光光度法）

注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1119

产品规格：50管/48样

产品说明：

谷胱甘肽S-转移酶（glutathione S-transferase，GST）是一种具有多种生理功能的蛋白质家族，主要存在于细 胞质内。GST是体内解毒酶系统的重要组成部分，主要催化各种化学物质及其代谢产物与GSH的巯基共价结合， 使亲电化合物变为亲水物质，易于从胆汁或尿液中排泄，达到将体内各种潜在或具备毒性的物质降解并排出体外 的目的。因此，GST在保护细胞免受亲电子化合物的损伤中发挥着重要的生物学功能。此外，因为GST具有GSH-Px 活性，亦称为non-Se GSH-Px，具有修复氧化破坏的大分子如DNA、蛋白质等的功能。注意，GST催化的反应减少GSH含量，但是不增加GSSG含量。

GST催化GSH与CDNB结合，其结合产物的光吸收峰波长为340nm；通过测定340nm波长处吸光度上升速率，即可计算出GST活性。

注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者 增加样本量进行检测。

产品组成：

溶液的配制：

试剂三：临用前加5mL蒸馏水溶解。

需自备的仪器和用品：

紫外-可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、研钵/匀浆器、1mL石英比色皿和蒸馏水。

操作步骤：

一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）

1.        组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。8000g，4℃离心10min，取上清置冰上待测。

2.        细菌、真菌：按照细胞数量（10⁴个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

3.        血清等液体：直接测定。

二、测定步骤

1.        分光光度计预热30min，调节波长到340nm，蒸馏水调零。

2.        试剂二放在25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）保温。

3.        空白管：取1mL石英比色皿，加入100μL试剂一，900μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后于340nm测定10s吸光度记A1，25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴5min后，快速取出测定吸光度记A2。

4.        测定管：取1mL石英比色皿，加入100μL上清液，900μL试剂二和100μL试剂三，迅速混匀后于340nm测定10s吸光度记A3，25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴5min后，快速取出测定吸光度记A4。

三、GST计算公式：

（1）按蛋白浓度计算

活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化1μmol CDNB与GSH结合为一个酶活性单位。

GST（U/mg prot）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷（ε×d）×10⁶×V反总÷(Cpr×V样)÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷Cpr

（2）按样本质量计算

活性单位定义：在25℃或者37℃中，每克样本每分钟催化1μmol CDNB与GSH结合为一个酶活性单位。

GST（U/g 质量）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷(ε×d)×10⁶×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W

（3）按细胞数量计算

活性单位定义：在25℃或者37℃中，每10⁴个细胞每分钟催化1μmol CDNB与GSH结合为一个酶活单位。

GST（U/10⁴cell）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷（ε×d）×10⁶×V反总÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷细胞数量

（4）按液体体积计算

活性单位定义：在25℃或者37℃中，每毫升液体每分钟催化1μmol CDNB与GSH结合为一个酶活单位。

GST（U/mL）=[(A4-A3)-(A2-A1)]÷（ε×d）×10⁶×V反总÷V样÷T

=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)]

ε：产物摩尔消光系数，9.6×10³ L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；10⁶：单位换算系数，1mol=1×10⁶μmol；V反总：反应体系总体积，1100μL=0.0011 L；Cpr：上清液蛋白质浓度（mg/mL），需要另外测定；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1mL；T：反应时间，5min；W：样本质量，g；V样总：试剂一体积，1mL；细胞数量：以10⁴为单位，万。

注意事项：

1.        样本处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力。

2.        细胞中GST活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中GST的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。

3.        若样本测定吸光度大于1，建议对样本用蒸馏水稀释，计算时结果乘以稀释倍数。

4.        测定反映的温度对测定结果有影响，请控制在25℃或者37℃（哺乳动物）。

实验实例：

1.        取0.1g月季加入1mL试剂一进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，稀释50倍置冰上待测，按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A4-A3=0.647-0.587=0.06，ΔA空白管=A2-A1=0.591-0.539=0.052，按样本质量计算得： GST（U/g质量）=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W×50（稀释倍数）=0.92U/g质量。

2.        取0.1g肝加入1mL试剂一进行冰浴匀浆，8000g，4℃离心10min，取上清，稀释500倍置冰上待测，按照测定步骤操作，测得计算ΔA测定管=A4-A3=0.824-0.543=0.281，ΔA空白管=A2-A1=0.591-0.539=0.052，按样本质量计算得：GST（U/g质量）=0.23×[(A4-A3)-(A2-A1)] ÷W×500（稀释倍数）=263.35U/g质量。