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果胶酶检测试剂盒（DNS微板法）

产品货号：BA1545

产品规格：100T

产品简介：

天然果胶类物质以原果胶、果胶(Pectin)、果胶酸的形态广泛存在于植物的果实、根、茎、叶中，是细胞壁的一种组成成分，它们伴随纤维素而存在，构成相邻细胞中间层粘结物，使植物组织细胞紧紧黏结在一起。果胶酶(Pectinase)是一类分解果胶质酶类的总称，实质是多聚半乳糖醛酸水解酶，包括原果胶酶，果胶酯酶，多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类，广泛存在于植物果实和微生物中，主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。

果胶酶检测试剂盒(DNS微板法)检测原理是果胶酶水解果胶生成β-半乳糖醛酸，通过二硝基水杨酸(DNS)与反应形成紫红色的化合物，该化合物呈色强度与半乳糖醛酸浓度成正比，于酶标仪测定吸光度，通过与标准曲线比较，计算出样品中果胶酶活性。该试剂盒主要用于定量检测植物组织或果实中果胶酶，反应颜色越深，吸光度越大，果胶酶的活性越强。该100T试剂盒可以检测约95-98次样本。该试盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1.        蒸馏水

2.        实验材料：桃子、李子、苹果、杏等果实或其他植物组织

3.        研钵或匀浆器

4.        离心管或试管

5.        离心机

6.        水浴锅

7.        96孔板

8.        酶标仪

操作步骤：

1.        果胶酶提取：取果实或其他植物组织，洗净，擦干，称取剪碎的新鲜样品，置于提前4℃预冷的研钵或匀浆器，加入预冷的Pectinase Lysis buffer，充分研磨或匀浆后转入离心管或试管，离心。留取上清液，即为果胶酶提取液，保存待用。

2.        稀释果胶标准溶液：取适量的果胶标准(1mg/ml)，按下表进行稀释：

3.        加样：按照下表设置空白管、标准管、对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡，小心混匀。如果样品中的果胶酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行管，求平均值。

4.        测定：沸水浴，自来水中将离心管或试管冷却至室温，以蒸馏水稀释，混匀。取上述空白管、标准管、测定管中溶液，加至96孔板的孔中，用酶标仪以空白调零，测定系列标准孔、对照孔、测定孔在吸光度。

计算：

以1-5号管系列果胶标准(4、8、12、16、20μg)为横坐标，以对应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，直接计算直线回归方程。以测定孔吸光度减去对照孔吸光度的差值作为测定吸光度值(A_测定)，带入回归方程求得的定管果胶酶含量，根据下述公式计算其活性：

组织样品的果胶酶活性（μg/hg）=（m×v）/（W×t×V_S）

式中：m=根据标准曲线求得的测定管果胶酶含量（μg）

V=果胶酶提取液总体积（ml）

W=样品鲜重（g）

t=37℃水浴时间（h）=1

V_S=测定时所取果胶酶提取液的体积（ml）=0.2

液体样品的果胶酶活性(μg/h·ml)=m×N/V

式中：m=根据标准曲线求得的测定管果胶酶含量(μg)

N=稀释倍数

V=测定时所取果胶酶提取液的体积(ml)=0.2

注意事项：

1.        取样量、试剂用量应根据果胶含量适当调整。 

2.        可溶性糖对测定结果有较大影响，应*去除样品中的可溶性糖。

3.        Pectinase Lysis buffer应密闭避光保存，避免有效成分挥发。 

4.        如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但应考虑分光光度计的最小检测体积。 

5.        为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：6个月有效。