葡萄糖氧化酶（GOD）活性检测试剂盒 返回列表页

葡萄糖氧化酶（GOD）活性检测试剂盒（微量法）

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1245

产品规格：100管/96样

产品简介：

GOD（EC 1.1.3.4）广泛存在于动物和植物中，催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸，并产生H₂O₂，是生物体中产生活性氧的代谢途径之一。

GOD催化葡萄糖产生H₂O₂，过氧化物酶在有氧存在时催化H₂O₂分解产生的氧又将邻联茴香胺氧化生成有色物质，颜色深浅与葡萄糖氧化酶活性成线性关系。

产品内容：

提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；

试剂一：液体15mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：液体3mL×1瓶，4℃保存；

试剂三：液体1mL×1支，-20℃保存，融化后可分装保存。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水

操作步骤：

一、样品测定的准备

1、组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）：直接检测。

二、测定步骤

1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至500nm，蒸馏水调零。

2、GOD工作液的配制：取15mL试剂一加3mL试剂二混匀（现配现用）。

3、加样表：

样品测定前将GOD工作液与试剂三放入37℃水浴中保温，然后将上述试剂按顺序加入微量比色皿/96孔板中，加样本的同时开始计时；在500 nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1及1分20秒时的吸光度A2。计算∆A=A2-A1。

三、GOD活力单位的计算

a.用微量玻璃比色皿测定的计算公式如下

1、动物组织 GOD 活力的计算

（1）按蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1µmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mg prot）=∆A÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)÷T=1333×∆A÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1µmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/g鲜重）=∆A÷(ε×d)×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=1333×∆A÷W

2、血清（浆）GOD 活力的计算

单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生1µmol 氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mL）=∆A÷(ε×d)×V反总÷T÷V样本=1333×∆A

V反总：反应总体积，0.2mL；V样本：加入样本体积，0.02mL；V提取，加入提取液体积，1mL；cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；d：光径，1cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5×10^-3mL/µmol/cm；T：反应时间，1min。

b.用96孔板测定的计算公式如下

1、动物组织GOD活力的计算

（1）按蛋白浓度计算

单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1µmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mg prot）=∆A÷(ε×d)×V反总÷(Cpr×V样)÷T=2222×∆A÷Cpr

（2）按样本鲜重计算

单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1µmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/g 鲜重）=∆A÷(ε×d)×V反总÷(W÷V提取×V样)÷T=2222×∆A÷W

2、血清（浆）GOD 活力的计算

单位的定义：每mL血清（浆）在反应体系中每分钟催化产生1µmol氧化型邻联茴香胺定义为一个酶活力单位。

GOD（U/mL）=∆A÷(ε×d)×V反总÷T÷V样本=2222×∆A

V反总：反应总体积，0.2mL；V样本：加入样本体积，0.02mL；cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；d：光径，0.6cm；ε：氧化型邻联茴香胺消光系数，7.5×10^-3mL/µmol/cm；T：反应时间，1min

注意事项：

1、不同匀浆组织中GOD活力不一样，做正式试验之前请做1-2只预试，若A2-A1>1, 则说明组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液，使A2-A1<1，以提高检测灵敏度。

实验过程中若出现A1> A2现象请将样本用提取液稀释成适当浓度.

2、最好两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。

3、此试剂盒仅适用于动物组织和动物血清（浆）。