葡萄糖脱氢酶（GCDH）检测试剂盒 返回列表页

葡萄糖脱氢酶（GCDH）活性检测试剂盒(紫外分光光度法)

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1248

产品规格：50管/48样

产品简介：

GCDH（EC 1.1.1.47）催化D-葡萄糖和NAD(P)生成D-葡萄糖酸和NAD(P)H，主要存在于多种微生物和高等动物的肝脏中。GCDH是一种制备高含量低聚果糖的理想用酶，同时也是临床血糖测定的诊断用酶，可广泛用于食品工业及医药工业领域中。

GCDH 催化D-葡萄糖和NAD生成D-葡萄糖酸和NADH，利用NADH在340 nm处吸光值的变化即可反映葡萄糖脱氢酶的活性。

产品内容：

提取液：液体60 mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体50 mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存。临用前加入15mL试剂一溶解，用不完的试剂4℃保存。

试剂三：粉剂×2瓶，-20℃避光保存。临用前每瓶加入5mL试剂一溶解，用不完的试剂建议分装后-20℃避光保存，避免反复冻融。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计、台式低温离心机、水浴锅、1 mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

组织：按照组织质量（g）︰提取液体积(mL)为1︰5~10的比例（建议称取约0.1 g组织，加入1 mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，8000 g，4℃，离心10 min，取上清置于冰上待测。

细胞或细菌：先收集细胞或细菌到离心管内，离心后弃上清；按照细胞数量（10⁴个）︰提取液体积（mL）为500~1000︰1的比例（建议500万个细胞或细菌加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞或细菌（功率20%或200 W，超声3s，间隔7s，总时间5min）；然后8000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。

血浆（清）：直接检测。

二、测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340 nm，蒸馏水调零。

2、工作液的配制：按照试剂一︰试剂二︰试剂三为4︰3︰2的体积比例充分混匀，备用，用前37℃预热10 min。

3、 操作表：在1mL石英比色皿中分别加入下列试剂：

三、GCDH 酶活计算：

（1）按蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟产生1nmol 的NADH定义为一个酶活力单位。

GCDH 酶活（U/mg prot）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反总÷（V样×Cpr）÷T=1607.7×ΔA÷Cpr

（2）按样本质量计算

酶活定义：每克样品每分钟产生1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

GCDH 酶活（U/g 鲜重）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反总÷（V样×W÷V样总）÷T =1607.7×ΔA÷W

（3）按细菌和细胞数量计算

酶活定义：每10⁴个细胞每分钟产生1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

GCDH 酶活（U/10⁴cell）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量（万个））÷T

=1607.7×ΔA÷细胞数量（万个）

（4）按液体体积计算

酶活定义：每mL样本每分钟产生1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。

GCDH 酶活（U/mL）=ΔA÷（ε×d）×10⁹×V反总÷V样÷T=1607.7×ΔA

ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×10³ L/ mol /cm；d：比色皿光径，1cm；10⁹：单位换算系数， 1mol=10⁹ nmol；V反总：反应体系总体积，1×10^-3 L；V样：反应体系中样本体积，0.1mL；V样总： 加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W：样本质量，g，T：反应时间：1min。

注意事项：

1、样本提取上清液置于冰上待测，且样本提取完成后建议当天提取当天内测完。

2、当A1或A2大于1时，建议将样品用提取液稀释后再进行测定。

3、当ΔA大于1时，建议将样品用提取液稀释后再进行测定。