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漆酶活性检测试剂盒（可见分光光度法）

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1256

产品规格：50管/48样

产品简介：

漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，漆酶存在菇、菌及植物中，是一种环保型酶，其*的催化性质在生物检测中有广泛的应用。

漆酶分解底物ABTS产生ABTS自由基，在420nm处的吸光系数远大于底物ABTS，测定ABTS自由基的增加速率，可计算得漆酶活性。

产品内容：

提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×2瓶，4℃避光保存。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、低温离心机、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、天平、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水，水浴锅。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

（1）组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

（2）细胞：按照细胞数量（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置于冰上待测。

（3）培养液：直接检测。

二、测定步骤：

1、 分光光度计预热30min以上，调节波长至420nm，蒸馏水调零。

2、 水浴锅温度调至45℃。

3、 工作液的配制：一瓶试剂二用25mL试剂一溶解。现用现配。

4、 操作表：在1mL玻璃比色皿中分别加入下列试剂：

三、漆酶活计算：

（1）按蛋白浓度计算

酶活定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/mg prot）=△A÷ε÷d×V反总×10⁹÷（V样×Cpr）÷T= 61.7×△A÷Cpr

（2）按样本质量计算

酶活定义：每克样品每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/g 鲜重）=△A÷ε÷d×V反总×10⁹÷（V样×W÷V样总）÷T= 61.7×△A÷W

（3）按细胞数量计算

酶活定义：每10⁴个细胞每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/10⁴ cell）=△A÷ε÷d×V反总×10⁹÷（V样×500÷V样总）÷T= 0.123×△A

（4）按液体体积计算

酶活定义：每mL液体每分钟氧化1nmol底物ABTS所需的酶量为一个酶活力单位。

漆酶酶活（U/mL）=△A÷ε÷d×V反总×10⁹÷V样÷T= 61.7×△A

ε：ABTS 摩尔消光系数：36000L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.001L；V样：反应中样本体积，0.15mL；V样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL，蛋白浓度需自行测定；W，样本质量，g；T：反应时间，3min。

注意事项：

1、工作液需临用前配制，并且尽快使用，4℃保存一周，若变色则不能使用。

2、测定之前进行预实验，若吸光值较高，请将样品用提取液进行适当的稀释再测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

3、空白管为检测各试剂组分质量的检测孔，正常情况下，OD值变化不超过0.05。