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羧酸酯酶（CarE）活性检测试剂盒（可见分光光度法）

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1282

产品规格：50管/48样

产品简介：

哺乳动物CarE，也称脂族酯酶（aliesterase），广泛分布于组织和器官，属于丝氨酸水解酶家族。CarE催化含酯键、酰胺键和硫酯键的内源性与外源性物质水解，但不能催化水解乙酰胆碱及其类似物。CarE参与脂质运输和代谢，并且与多种药物、环境毒物以及致癌物的解毒和代谢有关，有机磷农药可结合并且抑制CarE活性。

CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯，固蓝显色；在450nm光吸收增加速率，计算CarE活性。

产品内容：

提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。用前用20mL无水乙醇充分溶解.

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。用前将全部试剂三倒入试剂二瓶中充分溶解。 

试剂三：液体30mL×1瓶，4℃保存。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、低温离心机、水浴锅、可调式移液枪和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细胞（功率20%，超声3s，间隔10s，重复30次）；然后15000rpm，4℃，离心30min，取上清置于冰上待检。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(ml)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆。15000rpm，4℃，离心30min，取上清置于冰上待检。

血清：直接测量。

二、测定步骤：

1、分光光度计预热30min以上，调节波长至450nm，蒸馏水调零。

2、试剂二和试剂一置于37℃水浴中预热30min以上。

3、在1mL玻璃比色皿中进行如下操作：

迅速混匀后，测定第10s的吸光值记为A1空和A1测，反应3min，吹打混匀后立即测定190s的吸光值，记为A2空，A2测。注意：空白管只需做1~2次。计算△A空白管=A2空-A1空，△A测定管=A2测-A1测。

CarE 活性计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：37℃下，每mL反应体系每mg组织蛋白每分钟催化吸光值增加 1 定义为一个酶活力单位。

CarE 酶活(U/mg prot)= (△A测定管-△A空白管)×V反总÷(Cpr×V样)÷T

= 21.67×(△A测定管-△A空白管)÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：37℃下，每mL反应体系每g组织鲜重每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。

CarE 酶活(U/g 鲜重)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷（W÷V样总×V 样）÷T

=21.67×(△A测定管-△A空白管)÷W

（3）按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：37℃下，每mL反应体系每1万个细菌或细胞每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。

CarE 酶活(U/10 ⁴cell)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总÷（200÷V细胞样总×V样）÷T

=0.044×(△A测定管-△A空白管)

（4）按血清计算：

单位的定义：37℃下，每mL反应体系每mL血清每分钟催化吸光值增加1定义为一个酶活力单位。

CarE 酶活(U/mL)= (△A测定管-△A空白管) ×V反总 ÷V血清÷T

=21.67×(△A测定管-△A空白管)。

V样总：上清液总体积，1mL；V样：加入样本体积，0.015 ml；T：反应时间，3min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；200：细菌或细胞总数，200万；V 细胞样总：细胞中加入的试剂一体积，0.4mL；V血清：加入血清体积，0.4mL；V反总：反应体系总体积，0.975mL。

注意事项:

1、动物组织样品一般稀释10倍进行操作测定。

2、当吸光值大于1时，建议将样品稀释后测量。计算公式注意乘以稀释倍数。

3、建议反应时保持37℃的环境，逐一比色，不建议用96孔板同时测很多样品。