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酸性木聚糖酶(ACX)活性检测试剂盒（微量法）

注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。

产品货号：BA1279

产品规格：100管/48样

产品简介：

木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，酸性木聚糖酶(ACX)一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。

ACX在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm吸光值增加速率，可计算ACX活力。

产品内容：

缓冲液：液体60mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体7mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂二：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。

试剂三：液体4mL×1瓶，4℃保存。

标准品：粉剂×1支，4℃保存。10mg木糖，临用前加入667µL蒸馏水溶解，得到100µmol/mL木糖溶液，蒸馏水稀释50倍得到2µmol/mL木糖标准溶液。

需自备的仪器和用品：

天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板和蒸馏水。

操作步骤：

一、粗酶液提取

1、发酵液：发酵液于8000rpm，4℃，离心15min，取上清，作为待测样品。

2、酶干粉：称约1mg，加1mL缓冲液溶解，蒸馏水稀释10倍待测。

3、组织样品：称约0.1g组织，加入1mL缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心15min，取上清蒸馏水稀释 10倍待测。

二、测定步骤

1、可见分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定（在EP管中加入下列试剂）

三、ACX 活性计算：

1、发酵液ACX活力计算：

酶活定义：50℃，pH4.8条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1µmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX活力（U/mL）=C标准×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷T

=0.067×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）

C标准：木糖标准溶液浓度，2µmoL/mL；T：反应时间，30min。

2、酶干粉ACX活力计算：

酶活定义：50℃，pH4.8条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1µmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力（U/mg）= 10×C标准×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）×V提取÷W1÷T

=0.67×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷W1

10：样本稀释倍数，10倍；C标准：木糖标准溶液浓度，2µmoL/mL；V提取：加入缓冲液体积，1mL；W1：酶干粉重量，mg；T：反应时间，30min。

3、组织中ACX活力计算：

（1）按样品蛋白浓度计算：

酶活定义：50℃，pH 4.8条件下，每mg组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1µmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力（U/mg prot）= 10×C标准×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）×V样品÷（V样品×Cpr）÷T

=0.67×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷Cpr

（2）按样品鲜重计算：

酶活定义：50℃，pH4.8条件下，每克组织每分钟分解木聚糖产生1µmol还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。

ACX 活力（U/g 鲜重）= 10×C标准×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）×V提取÷W2÷T

=0.67×（A测定-A对照）÷（A标准-A空白）÷W2

10：样本稀释倍数，10倍；C标准：木糖标准溶液浓度，2µmoL/mL；V提取：加入缓冲液体积，1mL；W2：样本鲜重，g；T：反应时间，30min；Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；V样品：加入的样品体积，0.06mL。

注意事项：

吸光度变化应该控制在0.01~1.5之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。