维生素B2检测试剂盒（荧光光度法） 返回列表页

维生素B2检测试剂盒（荧光光度法）

产品货号：BA1717

产品规格：50T

产品简介：

维生素B2 (Vitamin B2 )又称核黄素，是一种异咯嗪衍生物，耐热、微溶于水，中性水溶液及乙醇溶液呈黄色，具有很强的荧光，在pH6~7的溶液中荧光*，在pH=11时荧光消失。核黄素可被还原性物质还原为无色的二氢化物，同时失去荧光，二氢化物在空气中易重新氧化，恢复其荧光。

尚宝维生素B2检测试剂盒(荧光光度法)是利用Vitamin B2水溶液在激发波长440~500nm(多为460nm)，发射波长范围约为510~550nm(多为520nm)，当加入有还原性的亚硫酸盐时，核黄素被还原为无荧光的物质，根据稀核黄素溶液荧光强度的变化即可定量检测Vitamin B2的含量。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

产品组成：

自备材料：

1.        待测样品如青菜、水果、牛奶等

2.        蒸馏水

3.        匀浆器

4.        稀盐酸或稀氢氧化钠

5.        离心管或试管

6.        荧光光度计

操作步骤 (仅供参考) ：

1.        稀释组织匀浆液：取适量的组织匀浆液(10×)，按组织匀浆液(10×)：蒸馏水=1：9的比例稀释，获得1×组织匀浆液，待用。

2.        样品准备：

A）固体样品：取待测材料如青菜、水果、松针等，清洗擦干，准确称量5g置于研磨器内研磨，加入少量1×组织匀浆液，研磨碎，留取上清，再次用1×组织匀浆液研磨，最后一并倒入50ml离心管，补充1×组织匀浆液至50ml，用氢氧化钠或盐酸调节pH值至4.5(如无条件可用pH试纸粗略测定)，充分混匀后4000g离心5min或者过滤，上清或滤液定容至50ml，滤液4℃保存备用。

B）液体样品：牛奶、饮料等液体样品，取10ml牛奶于100ml烧杯中，加入0.1mol/L的稀盐酸50ml，放入灭菌锅中处理30min，冷却后用稀氢氧化钠调pH至6，再用稀盐酸调pH至4.5，沉淀杂质，过滤后将滤液转移至100ml容量瓶中定容，滤液4℃保存备用。

3.        稀释标准品：取适量的Vitamin B2标准(100μg/ml)，按Vitamin B2标准(100μg/ml)：1×组织匀浆液=1：9稀释成Vitamin B2标准(10μg/ml)，4℃保存。注意：Vitamin B2标准(100μg/ml)需要充分溶解混匀，否则会导致标准值不准确。

4.        制备亚硫酸盐工作液：取一支亚硫酸盐100mg粉末，充分溶解于2ml蒸馏水，即配制成50mg/ml的亚硫酸盐工作液，即配即用。

5.        Vitamin B2检测：选用恰当的滤色片，测定的激发波长为460nm，发射波长为520nm。提前预热仪器30min，蒸馏水调零，以下表6号管的Vitamin B2标准(2.5μg/ml)作为参比溶液调荧光光度计的荧光强度读数满刻度(100%)，分别测定其他标准溶液和待测样品的相对荧光强度，如果荧光强度大于100%，需要稀释后再行测定。分别测定加入亚硫酸盐工作液前后的荧光值，记为F₀和F_T 。加入亚硫酸盐后，应充分混匀，及时检测。

Vitamin B 2 检测标准曲线绘制及待测样品操作表

计算：

溶液的荧光强度校准值：F= F₀ -F_T

式中：F=校正后的荧光强度

F₀=还原前荧光强度

F_T=还原后荧光强度

以各管Vitamin B2标准的浓度(μg/ml)或含量(μg)为横坐标，以对应的校正后的荧光强度(F)为纵坐标，做出Vitamin B2标准曲线。

根据 Vitamin B2标准曲线及样品管的校正后的荧光强度 (F)即可计算出待测样品中Vitamin B2的实际浓度和含量。

100ml液体样品中VitaminB2含量(μg/100ml)= C×V₂ ×100/V₁

100g固体样品中Vitamin B2含量(μg/100g)=C×V₃ ×100/m

式中：C=待测样品中Vitamin B2的浓度(μg/ml)

V₁ =检测体系中加入的滤液体积(ml)=5

V₂ =液体样本滤液的总体积(ml)=100

V₃ =固体样品的上清液总体积(ml)=50

m=固体样品的质量(g)=5

注意事项：

1.        在上述操作中，要严格避免VitaminB2受到阳光直射，否则易分解。

2.        待测样品如不能及时测定，应置于2~8℃避光保存，3天内稳定。

3.        含核黄素的标准品或样品一旦加入亚硫酸盐后会因产生二氢化物失去荧光，但二氢化物在空气中又易重新氧化，恢复荧光，因此应在10min内检测完毕，而且越快越好。

4.        如果样品浓度过高，应用蒸馏水稀释后重测，结果乘以稀释倍数。

有效期：6个月有效。4℃运输，4℃保存。