组织细胞RNA提取试剂盒 核酸类 返回列表页

组织细胞RNA提取试剂盒（Trizol提取法）

产品货号：11131

产品规格：50T/100T

产品简介：

RNA的种类来源比较多，提取制备的方法各异，一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法，其中常用的是苯酚法，即Trizol法提取RNA。 Trizol含苯酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持RNA的完整性。加入氯仿并离心后，溶液形成上层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上层用异丙醇沉淀回收总RNA，中间层用乙醇沉淀回收DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。组织细胞RNA提取试剂盒(Trizol提取法)适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～100mg组织、5×106细胞)，也可用于大量样品(>1g组织/>107细胞)。提取的总RNA质量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程1小时内完成；③纯度高；④污染少。

产品组成：

        试剂(F): RNA 保存液              10ml               20ml        4℃，避光

自备材料：

1. 液氮\研钵或匀浆器

2. 经 RNase free 处理的移液器吸头、EP 管等耗材

3. 低温高速离心机、低温冰箱

操作步骤(仅供参考)：

1. 样品准备

   ⑴ 贴壁细胞：①直接裂解：直接在培养瓶/皿中加入 Trizol 裂解细胞，每 10cm2面积加 1ml，用移液器吹打混匀。②胰蛋白酶消化：用无菌 PBS 洗涤细胞后，加入含有 0.05～0.25%胰蛋白酶的 PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无 RNase 的离心管中，以下参考悬浮细胞相关操作步骤。

   ⑵ 悬浮细胞：无需清洗细胞，直接 5000～6000g 离心 5min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不*，降低 RNA 收获率。每 5×106～107，动物、植物和酵母细胞或每 10 细菌细胞加入 1ml Trizol，充分振荡混匀。

   ⑶ 组织：取新鲜动物或者植物组织或者-70℃冻存组织，50～100mg 组织在液氮中充分研磨或者加入 1ml Trizol研磨或者用匀浆器匀浆处理。样品体积一般不超过 Trizol 体积的 10 %。研磨要迅速，以 1min 为佳。⑷ 血液：取 0.5～1 ml 新鲜或冻存的血液，12000g 离心 5 min，去除血浆，加入 1 ml Trizol，充分振荡混匀。
   

2. 核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存 5～10 min 后，充分振荡，反复 1～3 次)。将裂解样品或匀浆液室温静置 5～10min，使核蛋白与核酸*分离。

3. 样品分层：加入 0.2 ml RNA 分离液，振荡 15 s，室温静置 2～3min。12000 g 4℃离心 10～15 min。上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA 在上层水相。4. 沉淀 RNA：吸取上层水相(约 500μl)转移至无 RNase

4. 沉淀 RNA：吸取上层水相(约 500μl)转移至无 RNase 的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA 污染)，加入等体积 RNA 沉淀液混匀，室温放置 15～20min。12000 g 4℃离心 10min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。

5. 洗涤 RNA：加入 1ml RNA 洗涤液轻轻洗涤沉淀，室温放置 5～10min，7500g 4℃离心 5min，弃上清。室温干燥 5～10min，不宜过分干燥，否则 RNA 难以溶解。

6. 溶解 RNA：加入 30～50ul RNase-free dd H 2 O 充分溶解，-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中 RNase 含量高的样品沉淀用 RNA 保存液溶解。

注意事项：

1. 样品保存：加入 Trizol 混匀后，样品可在-70℃放置 1～2 月；RNA 样品可以在 70%酒精中-70℃保存 2～4周：如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存

2. Trizol Reagent 和 RNA 分离液含有腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：12个月有效。