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Lezol（总RNA提取试剂盒）  核酸类

产品货号：T11163

产品规格：50ml/100ml

产品简介：

Lezol(总RNA提取试剂) 核酸类 Lezol是一种尚宝生物自主研发和生产的用于细胞或组织的总RNA提取试剂。Lezol采用不Invitrogen TRIzol相似的原理和方法，Lezol颜色、抽提的方法和步骤亦不Invitrogen TRIzol*相同。Lezol含酚和异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞或组织并且灭活核酸酶，保持RNA的完整性。加入氯仿并离心后，溶液形成上清层为水相(无色)、中间层、下层为有机相(红色)。上清层用异丙醇沉淀回收总RNA，中间层用乙醇沉淀回收DNA，下层用异丙醇沉淀回收蛋白。尚宝生物 Lezol适用于从各种组织或细胞中快速分离总RNA，既可用于小量样品(50～100mg组织、5×10细胞)，也可用于大量样品(>1g组织/>10细胞)。提取的总RNA质量高，可用于Northern blot、Dot blot、polyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。Lezol具有以下特点：①适用范围广；②操作简单，整个过程1小时内完成；③纯度高；④污染少。

产品组成：

自备材料：    

1. 试剂：无水乙醇、氯仿、异丙醇、DEPC处理水等。 

2. 耗材： RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，RNase是导致RNA降解的最主要物质，非常稳定。操作时应佩戴一次性口罩、手套、帽子。塑料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等应清除RNase，移液器吸头、EP管等制品的RNase free处理尤为重要。 

3. 仪器：低温高速离心机、低温冰箱。

操作步骤（仅供参考）：    

1. 样品准备

 (1) 贴壁细胞：

 1 接裂解：直接在培养瓶/皿中加入Lezol裂解细胞，每10cm面积加1ml Lezol，用移液器吹打混匀。

 2 胰蛋白酶消化：用无菌PBS洗涤细胞后，加入含有0.05～0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基终止反应，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，5000～6000g离心5min，收集细胞沉淀，去除上清。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则裂解不*，降低RNA收获率。血液：取0.5～1 ml新鲜或冻存的血液，12000g离心5min，去除血浆，加入1ml Lezol，充分振荡混匀。 

2. 核酸分离：充分振荡混匀(可以置于低温/超低温冰箱冻存5～10min后，充分振荡，反复1～3次)，将裂解样品或匀浆液室温放置5～10min，使核蛋白不核酸*分离。 

3. 样品分层：加入0.2ml氯仿/1ml Lezol，剧烈振荡15s，室温放置2～3min。置于4℃离心机，12000g离心10～15min。上层为水相，中间层和下层为有机相，RNA在上层水相。 

4. 沉淀RNA：吸取上层水相(约500μl)转移至无RNase的离心管中(不要吸取任何中间层物质,否则会有染色体DNA污染)，加入等体积异丙醇混匀(或者加入1.2倍体积尚宝生物Trizol与用RNA沉淀液，超低温冰箱放置2～3hr,可以大大提高RNA回收率），室温放置15～20min。12000g 4℃离心10min，离心后管侧或管底形成胶状沉淀，弃上清。

 5. 洗涤RNA：加入1ml DEPC水配制的75%乙醇/1ml Lezol洗涤沉淀(或者加入1ml尚宝生物Trizol与用RNA洗涤液，可以大大提高RNA纯度），室温放置5～10min，7500g 4℃离心5min，弃上清。室温干燥5～10min，不宜过分干燥，否则RNA难以溶解。

 6. 溶解RNA：加入30～50ul RNase-free ddH2O充分溶解RNA，-70℃长期保存或直接用于后续试验。对于肝、胰腺、肾等组织中RNase含量高的样品，沉淀时用100%去离子甲酰胺溶解。

分析与定量：

1. 测定样品在260nm和280nm的吸收值确定RNA的质量。按1OD=40pg RNA计算RNA的产率。OD260/280在1.8～2.0视为抽提RNA纯度较好。浓度在4μg/ml以上的样品适于用分光光度计测定。

 2. 进行甲醛变性琼脂糖电泳，确定RNA的完整性和污染情况。

 3. 核酸分析仪测定RNA的质量和纯度。

注意事项：

1. 样品保存：加入 Lezol 混匀后，样品可在-70℃放置 1～2 月；RNA 样品可以在 70%酒精中-70℃保存 2～4 周：如果需要长期保存，应置于超低温冰箱中保存。

 2. Lezol 是强腐蚀性物质，污染皮肤或眼睛后，立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。

 3. Lezol 可常温运输，建议保存 4℃保存。

 4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期：

12个月有效。

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试剂盒

· 细胞活力/毒性检测试剂盒

· 蛋白提取相关试剂盒

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· 生化试剂盒检测试剂盒

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