GB2005 化转克隆感受态

GB2005 化转克隆感受态态产品简介
含有一个突变的 trfA 基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有 oriV 复制子的质粒的高拷
贝扩繁，诱导剂Ⅰ可以诱导 trfA 基因的表达。当含有 oriV 复制子质粒的 EPI300 细胞在 LB/2YT 或 SOB 培
养基中生长时，trfA 基因的表达被抑制，oriV 复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平含有一个突变的 trfA 基因，该基

产品简介

GB2005 化转克隆感受态

GB05-dir 细胞含有一个突变的 trfA 基因，该基因表达出的蛋白产物可以促进含有 oriV 复制子的质粒的高拷

贝扩繁，诱导剂Ⅰ可以诱导 trfA 基因的表达。当含有 oriV 复制子质粒的 EPI300 细胞在 LB/2YT 或 SOB 培

养基中生长时，trfA 基因的表达被抑制，oriV 复制子质粒的拷贝数维持在很低的水平；当在培养基中加入

CopyMore 300 诱导剂时，oriV 复制子质粒的拷贝数可维持在很高的水平，提高了质粒产量。因此，

GB05-dir 菌株可以降低 oriV 复制子质粒的拷贝数，特别适合于各种不稳定 DNA 或毒性基因的克隆。 [mrr

hsdRMS-mcrBC]基因型使 EPI300 菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA（例如：哺乳动物

基因组 DNA）。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。lacZΔM15 标

记的

细胞的转化效率可达 108 cfu/μg DNA。

GB2005 化转克隆感受态

产品组成

组分

 

EPI400

化学感受态细胞

10 × 100 μL

100 × 100 μL

定制

基因型：F – mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZ∆M15 ∆lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara, leu)7697 galU galK λ– rpsL nupG

trfA dhfr

存储条件

-80 ℃保存；请勿将本品置于-20 ℃或者液氮中保存。

GB2005 化转克隆感受态

质量控制

无外源质粒 DNA 残留；

化学法转化效率≥108 cfu/μg pUC18 DNA。

使用方法

1. 将感受态细胞从-80 ℃中取出，置于冰浴中融化；

2. 将待转化 DNA 加入到 100 μL 感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育 30 min；

3. 将离心管置于 42 ℃水浴锅中，不要晃动，热激 90 s 后，立刻置于冰浴中静置 2-3 min；

4. 向离心管中加入 900 μL LB 或 SOC 培养基（室温或 37 ℃预热），然后置于 37 ℃摇床复壮 45 min；

5. 取不同体积的转化产物，用无菌涂布棒均匀涂布于正确抗性的平板上，于 37 ℃培养箱培养过夜。

注意事项

1. 感受态细胞冰浴中解冻后应立即使用；

2. 加入的待转化 DNA 的总体积不应超过感受态细胞体积的 1/10；

3. 加入待转化 DNA 后，不要用移液器吹吸感受态细胞，仅用手指轻弹即可；

4. 为确保.高转化效率，整个操作过程中除热激外均要保持低温，并且要尽量轻柔。