FastPfu DNA polymerase 酶

FastPfu DNA polymerase 酶

产品应置于-20 ℃保存。

产品质控

（1）性能检测 1：

在50 μL PCR 反应体系加入 1 U FastPfu DNA Polymerase、100 ng Human RP11 13M9-pBACe3.6 质粒，

扩增 15 kb 的DNA 目的片段，在 30 个循环扩增后经 1%琼脂糖凝胶检测可在 15 kb 处检测到较亮的单一目

的条带。

（2）性能检测 2：

在50 μL PCR 反应体系加入 1 U FastPfu DNA Polymerase、大肠杆菌菌落，扩增 5 kb 的DNA 目的片

段，在 30 个循环扩增后经 1%琼脂糖凝胶检测可在 5 kb 处检测到较亮的单一目的条带。

（3）大肠杆菌核酸残留检测：

在20 μL 荧光定量 PCR 反应体系加入 1 U FastPfu DNA Polymerase 和大肠杆菌特异基因扩增引物（如

gapA）；在不加入大肠杆菌 DNA 模板的情况下，20 个循环内荧光信号值在基线范围。

 FastPfu DNA polymerase 酶

常规 PCR 反应体系： 

1. 在冰浴上设置 PCR 反应（供参考）*：

模板:                     < 500 ng

2× FastPfu Buffer:   25 μL

Primer 1/2:               0.2 - 1.0 μM

dNTPs (10 mM):     1 μL

FastPfu:                  1 μL

灭菌蒸馏水 Up to 50 μL

2. PCR 反应参数（供参考）**：

(起始变性): 95 ℃ 5 min

(解链): 98 ℃ 5 sec

(退火): 55 ℃ 30 sec

(延伸): 72 ℃ x min （30-35 循环：2 kb/min）

(终延伸): 72 ℃ 7 min

* 针对不同类型的模板，所需的模板量会有不同，如基因组和质粒，等等；需要根据实际情况，添加合适的模

板量；** 退火温度需根据引物和模板实际的 G+C 含量来作调整