流式检测细胞内钙离子浓度 返回列表页

1.Fluo/Am储存液配制：将Fluo/Am溶于DMSO，配成终浓度为2mmol/L的储存液，分装，-70度冻存。
2.悬浮细胞染色：收集细胞并调整细胞浓度至2*10^6个/ml，加Fluo/Am至终浓度为5-10umol/L,置于，5%CO2。37度避光，孵育30-60min，其间轻轻振荡几次，并设置阴性对照（不加Fluo/Am）。
3.贴壁细胞染色：以5*10^5个细胞种植于24孔培养板中，置于5%CO2。37度培养一段时间，加入Fluo/Am至终浓度为5-10umol/L，置于5%CO2。37度避光，孵育30-60min。其间轻轻振荡几次，并设置阴性对照。
4.取出细胞或消化细胞，离心1500r/min 10min，去除多余染料，再用无钙缓冲液冲洗PBS反复离心洗涤2次，最后用无钙PBS重悬至0.5ml。
5.进行流式检测分析
结果分析：用488mm激发，FLI-H荧光通道收集荧光信号，收集1*10^4个细胞，细胞内钙的浓度用平均荧光表示。