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详细介绍
甲基化检测分子生物技术服务介绍
DNA甲基化存在于大多数真核生物中，一般发生在CpG双核苷酸中胞嘧啶的5’UTR区，起调控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化，20%处于基因调控区的CpG岛中。BSP甲基化测序（Bisulfite Genomic Sequencing PCR）的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理，非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶，在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不能被脱氨基，在反应完成时被保留，我们将扩增得到的PCR产物进行TA克隆测序，就可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确性高，是甲基化检测的金标准。通过对疾病及正常对照样本的靶基因进行甲基化分析，在研究肿瘤发生机制及早期诊断等方面均具有重要的临床意义。
甲基化检测分子生物技术服务实验流程
Q：常见的甲基化测定方法有哪些，优缺点是什么？
常见方法 | 优缺点 |
MSP法（Methylation-specific PCR，MSP）：重亚硫酸盐处理基因组DNA，分别设计针对甲基化和非甲基化序列的引物进行PCR。通过电泳检测MSP扩增产物，如果对甲基化DNA链的引物能得到扩增片段，则说明该位点存在甲基化；反之，说明被检测的位点不存在甲基化。 | 无需挑克隆测序，步骤简单，但对引物设计的要求较高，容易出现PCR假阳性，影响实验结果分析。 |
BSP法（Bisulfite sequencing PCR ，BSP）：重亚硫酸处理基因组DNA，设计BSP引物扩增，将PCR产物克隆至T载体测序，分析CpG位点是否发生甲基化。 | 可明确样本待测区段每个CG位点的甲基化程度；受实验方法和价格因素限制无法高通量。 |
高分辨率熔解曲线法（High Resolution Melting ，HRM）：重亚硫酸处理基因组DNA，未甲基化的胞嘧啶经PCR扩增后转变成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不变，导致样品中的GC含量发生改变后溶解温度变化，从而进行分析。 | 检测方法高通量，但是无法明确每个CG位点的甲基化程度。 |
客户须知：
| 实物 | 数据信息 | 实验周期 |
客户提供 | 待测样本 | 待测序列信息 | 7周或以上 |
我们提供 | 无 | 基本实验步骤、测序报告、圈点图 |
收费标准
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