本方案提供了使用SAINT sRNA(目录号:SR-2003-01、SR-2003-02、SR-2003-04)。
无血清转染方案:
1.准备细胞进行转染。
粘附细胞:转染前一天,将细胞置于0.5ml生长培养基血清中,使细胞在转染时融合50-80%。
悬浮细胞:在制备复合物之前,将0.5-1.5x106个细胞悬浮在0.5ml无血清生长培养基中。
2.让SAINT sRNA小瓶达到室温。
3.将SAINT sRNA充分涡旋约30秒。
4.使用1:40的siRNA(µg)与SAINT sRNA(µl)比率制备复合物。
5.对于每个转染样品,按如下步骤制备复合物:
a.在50µl PBS中稀释0.125μg siRNA。
b.将5µl SAINT sRNA加入siRNA/PBS溶液中,轻轻重新悬浮。
7.在室温下将混合物孵育5-10分钟(溶液可能看起来浑浊)。
8.向细胞中添加复合物:
粘附细胞:从细胞中吸取生长培养基,并将复合物填充至0.5ml使用无血清生长培养基。向细胞中加入去复合物(0.5ml)。
悬浮池:将制备的复合物逐滴加入孔中。
9.在37°C的CO2孵化器中孵育细胞2-3小时。
10.在基因敲除测试前1-3天。 向孔中加入1ml含血清的生长培养基,并在37°C的CO2孵化器中孵育细胞,
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