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甲基化特定的MLPA

甲基化特异性（MS）-MLPA ®是的变体MLPA技术。使用MS-MLPA，可以同时对多个目标的甲基化进行半定量分析。

MS-MLPA探针

像常规MLPA探针混合物一样，MS-MLPA探针混合物包含靶向特定基因组序列的探针。每个探针均由两部分组成：左探针寡核苷酸和右探针寡核苷酸（LPO和RPO）。MS-MLPA探针混合物中的某些探针靶向包含甲基化敏感性HhaI核酸内切酶限制性位点的区域。这些探针可用于甲基化分析。

MS-MLPA的原理

探针与样品DNA上的靶序列杂交。然后将HhaI酶用于消化未甲基化的双链探针-DNA复合物。

与未甲基化的样品DNA的复合物被消化。消化的探针无法按指数扩增，因此不会产生信号。具有甲基化样品DNA的复合物不会被HhaI消化，并会产生正常信号。

MS-MLPA反应

对于MS-MLPA的步骤是高度相似的概述的MLPA。重要的区别是过夜杂交后，该反应分为未消化和消化的反应。

未消化的反应用于确定拷贝数。在用于甲基化分析的消化反应中，HhaI酶与Ligase-65酶同时添加。

数据分析

Coffalyser用于分析数据。使用与常规MLPA相同的未消化反应确定拷贝数。通过将消化反应中的每个探针信号与未消化反应中的相应信号进行比较，可以确定DNA样品中的甲基化百分比。

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