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核酸外切酶III惠诚生物Exonuclease III

核酸外切酶 III Exonuclease III来源于大肠杆菌，是一个由四条相同的多肽链组成的环状四聚体，每个单链约包含310个氨基酸，属于III型外切酶家族。Exonuclease III是一种重要的单链DNA外切酶，可高效和序列特异性的切除DNA单链的5'端核苷酸。Exonuclease III可用于DNA的定性和定量分析、DNA-蛋白质相互作用的研究以及染色体结构的分析等。在RPA技术中使用Exonuclease III，可以有效减少非特异性扩增、提高检出灵敏度、加快反应速度、改善产物检测和减少引物二聚化等。Exonuclease III的加入可以产生协同作用，优化RPA反应，实现更快速、更灵敏和更专一的等温扩增，提高RPA技术的性能，拓展其应用范围。  

核酸外切酶III惠诚生物Exonuclease III

规格参数：

货号：EH04701 

规格：5000U/25000U     

为工业客户提供n*25000U。

质量控制:

纯      度: 经高效液相色谱（SEC-HPLC）和SDS-PAGE检测，纯度大于95%.

使用说明：

长期储存于-80℃，使用后保存于-20℃,避免反复冻融。

核酸外切酶 III 产品特点：

1. Exonuclease III 包含两个结合部位：

内切位点：与DNA杂交，定位切割位点;

外切位点：负责将磷酸基团从DNA磷酸主链上切除。

2. 单链特异性

Exonuclease III只可作用在DNA的单链区域，双链DNA区域不具有活性，这使其成为研究双链DNA解旋及DNA-蛋白质相互作用的重要工具。

3. 依赖性

Exonuclease III的活性依赖Mg2+或Mn2+，并受到溶液的pH值影响，最适作用pH为7.6。高浓度的NaCl可抑制其活性。

4. 切割效率

在最适条件下，Exonuclease III的切割速度为每秒500-1000个磷酸基团，切割效率较高。

核酸外切酶 III 催化机制:

1. 与DNA的5'端结合，内切位点识别切割位点;

2. 外切位点将第一个5'端的磷酸基团从DNA磷酸主链上切除，释放5'-磷酸单核苷酸;

3. Exonuclease III沿着DNA链移向3'端，重复步骤b，依序切除核苷酸;

4. 当遇到双链DNA区域或某些DNA修饰时，酶失去活性，终止切割。

核酸外切酶 III Exonuclease III主要应用如下:

1. DNA序列分析

使用Exonuclease III对单链DNA进行定向切割，分离切割产物，并通过测序分析其序列，这是一种简单有效的DNA序列分析方法。

2. 基因型分析

设计特异引物用于PCR扩增，然后使用Exonuclease III切割未连接的单链DNA，保留双链DNA。测序分析双链DNA可实现基因型的准确分析。 

3. DNA修饰检测

某些DNA修饰如甲基化可抑制Exonuclease III的活性，利用这一特点，可通过Exonuclease III切割检测DNA的修饰状态。

4. DNA多态性分析

Exonuclease III可用于切割单链DNA，分离并测序不同等位基因，实现DNA Sequence Variation的精确分析。

5. DNA损伤检测

DNA损伤会阻碍Exonuclease III切割，利用这一特性，可通过比较Exonuclease III切割效率判断DNA是否存在损伤。

6. DNA-蛋白质相互作用

Exonuclease III切割受DNA结合蛋白的影响，可用于标定DNA与蛋白质的结合位点及研究结合机理。

7. 核苷酸切除测定

使用放射性标记的DNA进行Exonuclease III切割，通过测量释放的放射性核苷酸定量切除效率，来研究影响Exonuclease III活性的因素。  

8. DNA解旋测定

将Exonuclease III用于双链DNA，通过比对双链区域和单链区域的切割情况来判断DNA的解旋状态，研究DNA的二级结构。

9. 核型分析

Exonuclease III可用于切割整个染色体DNA，产生特定长度的DNA片段，通过电泳分离并制作核型，实现遗传学分析。 

核酸外切酶 III Exonuclease III在RPA技术中应用：

1. 降低非特异性产物

RPA反应在一定条件下可能产生非特异性扩增产物，Exonuclease III可以选择性地降解这些非特异性产物的3'单链末端，减少其浓度,提高RPA产物的纯度和专一性。

2. 提高检出灵敏度

Exonuclease III可以降解未结合引物的单链DNA，但不会降解已与引物结合的特异性产物。这可以有效减少反应底物，提高特异性扩增产物的相对浓度，提高RPA的检出灵敏度。

3. 加快反应速度

Exonuclease III通过降解未结合引物的单链DNA，可以减少反应中的底物竞争，使更多的引物和DNA聚合酶结合到特异性的扩增区域，加快RPA的反应速度。

4. 改善产物检测

Exonuclease III降解RPA反应中的游离DNA后可以产生更纯净的特异性扩增产物，易于后续的电泳、测序分析等检测，有利于RPA产物的分析和鉴定。

5. 减少引物二聚化

部分引物在RPA反应条件下可能发生二聚化，影响其与模板DNA的结合。Exonuclease III可以降解这些引物二聚体，使更多的引物与模板DNA结合，提高RPA的扩增效率。

相关RPA原料：

EH04401 DNA重组酶 Recombinase A

EH03201 Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase

EH04801 核酸外切酶 IV Exonuclease IV

EH04701 核酸外切酶 III Exonuclease III

EH02501 M-MuLV反转录酶 M-MuLV Reverse Transcriptase

EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment

EH04501 重组肌酸激酶(CK) Creatine Kinase

EH03501 T4 UvsX重组酶 T4 UvsX Recombinase

EH03401 T4噬菌体基因32编码蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein

EH03601 T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein

HM0058 重组鼠源RNase抑制剂(40 U/µL) RNase Inhibitor