人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒实验使用说明书

　　以下是关于人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒的实验使用说明综合整理：

　　BS-1394人αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA试剂盒

　　一、实验原理

　　采用双抗体夹心法，通过包被抗体捕获样本中的αNAG，再与HRP标记的检测抗体结合形成复合物。加入TMB底物显色后，颜色深浅与αNAG浓度成正比，450nm波长下测定OD值计算浓度‌。

　　二、试剂盒组成

　　预包被酶标板‌：96孔板‌

　　标准品‌：冻干粉(通常含100 μg/ml原液)，需用样品稀释液复溶后梯度稀释‌

　　检测溶液‌：包括生物素标记抗体、HRP标记亲和素(需1:100稀释使用)‌

　　底物溶液‌：TMB显色液(A/B液需避光保存)‌

　　终止液‌：2N H2SO4溶液‌

　　洗涤液‌：30倍浓缩液，使用前需蒸馏水稀释‌

　　三、样本处理

　　血清/血浆‌：采集后离心(1000×g，10-20分钟)，避免溶血或反复冻融‌

　　细胞上清液‌：离心去除颗粒物‌

　　组织样本‌：需匀浆后离心取上清‌

　　四、操作步骤

　　标准品稀释‌：按说明书梯度稀释(如100→1.56 μg/ml)‌

　　加样‌：

　　标准品孔：50μl/孔

　　样本孔：40μl稀释液 + 10μl样本(5倍稀释)‌

　　孵育‌：37℃温育30-60分钟‌

　　洗涤‌：用稀释后的洗涤液洗板5次，拍干‌

　　显色‌：每孔加TMB底物A/B液各50μl，避光反应15分钟‌

　　终止‌：加入终止液50μl，立即测定OD450值‌

　　五、注意事项

　　试剂使用前需平衡至室温(20-30分钟)‌

　　避免底物接触金属器械或强光‌

　　不同批次试剂不可混用‌

　　显色后需在15分钟内读数‌

　　六、结果计算

　　以标准品浓度为横坐标，OD值为纵坐标绘制标准曲线，通过曲线方程计算样本浓度‌。

　　如需具体品牌试剂盒的完整说明书，可参考技术老师

　　注：以上资料仅供参考，本说明综合了多个厂商的通用流程，实际操作请以具体试剂盒说明书为准‌。

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