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微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA试剂盒的实验使用说明书通常包含以下关键信息,以下是一个基于通用ELISA试剂盒说明书的示例:
BS-5186-A 微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA科研试剂盒96T
BS-5186-B 微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA科研试剂盒48T
一、实验目的
用于测定微生物样本中法尼基焦磷酸合酶(FPS)的含量,适用于科研试验。
二、实验原理
试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。用纯化的法尼基焦磷酸合酶(FPS)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入法尼基焦磷酸合酶(FPS),再与辣根过氧化物酶(HRP)标记的法尼基焦磷酸合酶(FPS)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物。经过洗涤后加底物TMB显色,TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的法尼基焦磷酸合酶(FPS)含量呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中法尼基焦磷酸合酶(FPS)浓度。
三、试剂盒组成
试剂盒通常包含以下组件(以96孔配置为例):
酶标包被板:1块(96孔)。
标准品:1瓶(通常为已知浓度的FPS溶液,用于绘制标准曲线)。
标准品稀释液:1瓶。
酶标试剂:1瓶(含有HRP标记的FPS抗体)。
样品稀释液:1瓶。
显色剂A液:1瓶。
显色剂B液:1瓶(A液和B液混合后用于显色反应)。
终止液:1瓶。
浓缩洗涤液:1瓶(使用时需稀释)。
封板膜:2片。
密封袋:1个。
说明书:1份。
四、样本收集与处理
样本类型包括但不限于血清、血浆、组织匀浆、细胞上清等。收集样本后,应按要求进行离心、分装和保存,避免反复冻融。
五、操作步骤
从室温平衡后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃保存。
设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入酶标试剂100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育一定时间(如60min)。
弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置后甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板多次(如5次)。
每孔加入显色剂A、B各50μL,37℃避光孵育一定时间(如15min)。
每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
六、结果计算
以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线。根据待测样本的OD值,在标准曲线上查找对应的FPS浓度。
七、注意事项
实验过程中应保持实验环境的清洁和卫生,避免交叉污染。
严格控制实验条件,如温度、时间等,以确保实验结果的准确性和可重复性。
使用前应仔细阅读说明书,并严格按照说明书中的操作步骤进行。
试剂盒应在规定的保存条件下保存,避免过期使用。
请注意,不同品牌的微生物法尼基焦磷酸合酶(FPS)ELISA试剂盒在组成和操作步骤上可能略有差异,因此在使用前应仔细阅读具体品牌的说明书。
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